宫颈酸性磷酸酶CAP单克隆抗体的制备及CAP在早期宫颈癌筛查中的临床意义

摘要

目的:制备出宫颈酸性磷酸酶蛋白(Cervical acid phosphatase,CAP)的单克隆抗体,并对其相关的生物学特性进行鉴定;同时应用Mark-Pap试剂盒检测患者宫颈涂片中的CAP表达,并与TCT(Thinprep cytologic test)制片诊断确诊结果进行比较。方法:将CAP蛋白免疫Balb/c雌性小鼠,常规聚乙二醇介导融合,以间接ELISA方法筛选阳性克隆,有限稀释法亚克隆筛选单克隆细胞株,并使用秋水仙素对其核型进行鉴定,使用ISO-2鼠源单克隆抗体亚型检测试剂盒检测其亚类,并检测其效价、特异性等;用Mark-PAP试剂盒检测CAP蛋白在350例行常规妇科体检女性宫颈组织细胞中的表达,细胞内出现红色沉淀即为CAP阳性,并与TCT制片诊断确诊结果进行比较。结果:筛选出能够稳定分泌抗CAP单抗的杂交瘤细胞株1B11和3C12,其单克隆抗体的亚型经鉴定为IgG2b和IgG1,抗体的效价在106以上;宫颈酸性磷酸酶在宫颈癌患者组织细胞中呈阳性表达,而正常的子宫颈上皮细胞及炎症细胞中无CAP表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验制备出了CAP蛋白单克隆抗体1B11和3C12;CAP在1例高度鳞状上皮内病变患者和1例确诊为早期宫颈鳞癌患者的组织切片中呈阳性表达,提示宫颈酸性磷酸酶在宫颈癌早期诊断中可能具有指导意义。

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[第一部分]宫颈酸性磷酸酶CAP蛋白的单克隆抗体制备和特性鉴定

1. 前言

2 材料与方法

2.1 常用仪器

2.2免疫动物

2.3 骨髓瘤细胞的制备

2.4 饲养层细胞的制备

2.5 细胞融合

2.6 阳性克隆的筛选

2.7 冻存细胞株

2.8 CAP蛋白单克隆抗体的制备

2.9 CAP蛋白单克隆抗体的特性鉴定

3. 结果

3.1 CAP蛋白单克隆抗体的阳性克隆

3.2 1B11和3C12的融合效价

3.3 1B11和3C12的杂交瘤细胞核型分析

3.4 1B11和3C12单克隆抗体的亚类分析

3.5 腹水中单克隆抗体的纯化

3.6 3C12单克隆抗体识别抗原的特异性分析

4. 讨论

[第二部分] CAP在早期宫颈癌筛查中的临床意义

1.前言

2.材料与方法

2.1 常用仪器

2.2 试剂

2.3 材料

2.4 方法

2.5 诊断标准

3.结果

4.讨论

参考文献

附 录

致谢

综述