HIV-1 vpr基因表达载体 pAFVPRA 的构建

摘要

目的构建可在肝癌细胞中特异性表达人HIV-1 vpr基因的重组表达载体.方法用PCR的方法从pBSXCYPYVPR-xcTHY(简称vpr质粒)中扩增HIV-1 vpr基因片段,克隆到pGEM-T载体中,构建克隆载体pGEM-T/vpr,切下vpr片段后插入到pCI质粒中polyA的上游,构建中间载体pCI/vpr,再切下vprA(vpr+polyA)插入到pAF5.1中AFP 启动子的下游,从而把AFP 启动子和polyA尾分别克隆到vpr基因的上游和下游,构建成pAFVPRA载体.结果成功构建了带有AFP 启动子和polyA尾的载体 pAFVPRA.结论 pAFVPRA质粒构建成功后,可进一步通过合适的方式把HIV-1 vpr基因导入肝细胞,以探讨vpr基因对原发性肝癌细胞的杀伤作用.