中药材银柴胡及其混伪品的DNA条形码鉴定研究

摘要

筛选合适的DNA条形码序列,以建立基于DNA条形码技术的银柴胡及其混伪品鉴定方法。本文收集并提取60份银柴胡及其混伪品的DNA,对4种DNA条形码序列ITS、psb A-trn H、rbc L和mat K进行PCR扩增和测序,计算各序列PCR扩增和测序成功率;利用MEGA7.0分析序列特征、计算遗传距离,并构建Neighbour-joining （NJ）系统进化树;利用种间种内变异分析做Barcoding gap图;运用BLAST方法计算各序列鉴定成功率,通过以上指标综合评价不同序列的鉴别能力。结果显示, ITS序列的PCR扩增及测序成功率最高,为95.2%, matK最低,为75%; 4种序列的长度范围为211～797 bp, ITS的GC含量在各序列中最高,为54.35%; matK和ITS的鉴定成功率较高,分别为92%和90%; Barcoding gap图显示ITS有明显的间隔区, rbc L、mat K和psb A-trn H序列间隔区不明显或种间种内变异有部分重叠; NJ系统进化树显示, ITS可将银柴胡聚为一支,同属混伪品二柱繁缕与银柴胡明显分为不同支, rbc L和mat K不能把混伪品二柱繁缕分开。因此, ITS序列可作为银柴胡及其混伪品鉴定的优选条形码序列,为银柴胡的真伪鉴定提供科学依据。