建立以 TK 基因为标记将外源基因导入臭曲霉(Aspergillus foetidus)的选择系统及外源基因的表达

摘要

本文报道建立以胸腺嘧啶核苷激酶(TK)为标记,利用痘苗病毒 TK 基因为旁侧序列的外源基因载体,通过体内同源重组的原理将外源基因导入臭曲霉菌,并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BUdR)进行转化株选择的新系统,对黑曲霉菌 TK^+株的挑选、转化及选择条件等进行了研究。用这一系统,成功地将臭曲霉菌自身分离到的启动基因 H8驱动下的乙肝表面抗原(HBsAg)基因导入臭曲霉菌。Southern blot 和多次孢子传代证实,HBsAg 基因已与宿主的 DNA 稳定整合;在发酵上清液中,ELIAS 检测 HBsAg 为阳性(P/N 值在20左右),Western blot 有特异的带存在,免疫电镜观察发现,在发酵液中存在有与人血清中 HBsAg 颗粒大小、形态相似的 22nm 的颗粒。这些结果表明,HB(?)Ag 基因在臭曲霉菌中已获表达。本文建立的基因导入和选择系统可广泛应用于各种外源基因在臭曲霉菌中表达的研究。