短芽孢杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

摘要

用ＰＣＲ方法扩增短芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶基因，引入原核表达载体ｐＢＶ２２０中，得到重组质ｐＡＬＤ１．ｐＡＬＤ１的ＡＬＤＣ基因在大肠杆菌中高效表达，每毫升发酵液产酶８０单位以上，双原始菌株提高２００余倍。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白质分析表明，大肠杆菌ＤＨ５α表达的ＡＬＤＣ占细胞总蛋白量的４０％以上。研究了重组质粒稳定性，大肠杆菌ＤＨ５α和ＨＢ１０１分别大无选择压力下３０℃连续培养５０代以上，４１℃诱导