用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒

摘要

选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV),缺失其HA基因裂解序列的4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL,将修饰的HA基因克隆入转录/表达载体pHW2000、构建质粒pHW524-HA,将该毒株和H9N2亚型毒株的NA全基因分别克隆入pHW2000,构建质粒pHW506-NA和pHW206-NA.将pHW524-HA与pHW506-NA或pHW206-NA组合、均用A/WSN/33(H1N1)提供6个内部基因,两个组合的8个质粒分别共转染COS-1细胞,产生了H5N1和H5N2两个亚型的基因重排病毒.通过在鸡胚中的连续传代和适应,2个重组病毒血凝价上升到1:29、表面基因稳定、对6周龄SPF鸡不表现致病性,H5N2重组病毒对鸡胚的毒力低于H5N1病毒.这种尝试证明反向遗传操作技术是研究AIV致病性和构建疫苗候选株的有用工具.