腾冲嗜热厌氧菌6-磷酸果糖激酶的克隆、表达及其生物活性

摘要

6-磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解途径一个关键酶.基于腾冲嗜热厌氧菌基因组中的注释,基因TTE1816可能是PFK的一种,但是,它是否确有生物活性还必须有实验数据的支持.腾冲嗜热厌氧菌在最适温度培养后,提取细菌全蛋白,并采用双向电泳将可溶性蛋白质分离,然后运用质谱鉴定若干染色斑点.实验表明,TTE1816在高温条件下能够表达蛋白质.将TTE1816基因体外克隆至细菌表达载体,并在BL-21大肠杆菌中表达为可溶性蛋白.酶动力学实验表明,重组蛋白TTE1816具有PFK的催化活性,最适反应温度在60℃.它还能够催化葡萄糖、果糖、甘露糖和6-磷酸葡萄糖的磷酸化反应.另外,在高底物浓度和酶浓度的条件下,TTE1816还表现果糖二磷酸酶的特性.结果证明,TTE1816是腾冲嗜热厌氧菌中PFK家族的一个新成员.