钝齿棒杆菌N-乙酰谷氨酸激酶基因的克隆、序列分析及表达

摘要

以钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)野生株AS 1.542及产精氨酸突变株971.1的基因组为模板,用PCR方法扩增出N-乙酰谷氨酸激酶基因(argB)片段.核酸序列分析结果表明,该片段全长1505bp,包含一个ORF,推测此ORF区编码一条317个氨基酸的多肽,分子量为33.6kDa.C.crenatum野生株AS 1.542与突变株971.1的argB基因序列比较,发现只在结构区有一个核苷酸的差别但没有引起氨基酸变化.野生株AS 1.542 argB基因的编码区核苷酸序列与C.glutamicum ATCC 13032、Corynebacterium efficiens YS-314和Escherichia coli k12的同源性分别是99.89%、76.62%和37.94%,而氨基酸同源性分别是100%、78.55%和25.25%.在C.crenatum argB基因上游存在启动子区域.经IPTG诱导该基因在棒杆菌中得到有效表达,野生株AS 1.542为宿主的重组子酶活明显提高.突变株971.1为宿主的重组菌酶活提高一倍,精氨酸积累提高约25%.