嗜酸丝状放线菌的选择性分离与多样性

摘要

[目的]针对酸性土壤中的嗜酸丝状放线菌,建立有效的选择性分离方法,并了解其多样性.[方法]用不同的样品预处理方式和分离培养基,并添加不同的抑制剂进行分离;根据放线菌的菌落数和出菌率确定最佳分离方法组合.采用最佳分离方法对从江西采集的17份酸性土壤样品进行分离;根据培养特征对分离菌株进行分群,进一步通过对各类群的显微形态观察和DH梯度生长实验确定代表菌株;对代表菌株进行16s rRNA基因序列分析研究其多样性.[结果]嗜酸丝状放线菌的最佳分离方法为:土壤样品经分散差速离心预处理后,涂布添加了放线菌酮、制霉菌素和萘啶酮酸(各50 mg/L)的GTV培养基.用此方法共分离到放线菌369株,归为10个不同的颜色类群,其中6.6%为严格嗜酸放线菌,72.4%为中度嗜酸放线菌,21.0%为耐酸放线菌.52株嗜酸放线菌代表菌株分布于放线菌目中的12个属:链霉菌属(Streptomyces)、小单孢菌属(Micromonospora)、诺卡氏菌属(Nocardia)、野野村菌属(Nonomuraea)、韩国生工属(Kribbella)、小双孢菌属(Microbispora)、马杜拉菌属(Actinomadura)、拟无枝菌酸菌属(Amycolatopsis)、指孢囊菌属(Dactylosporangium)、伦茨氏菌属(Lentzez)、游动四孢菌属(Planotetluspora)和链嗜酸菌属(Streptcidiphilus),其中链霉菌分离菌株在系统发育树上形成12个不同的进化类群.[结论]所建立的选择性分离方法可用于土壤嗜酸丝状放线菌的高效分离;江西酸性土壤含有丰富多样的嗜酸丝状放线菌种属.