粗糙脉孢菌26 S蛋白酶体三个亚基缺失菌株的构建及表型分析

摘要

[目的]通过构建26 S蛋白酶体的3个亚基RPN4、RPN7、RPN10的缺失突变菌株,研究这些缺失突变体的表型,进而探究这3个亚基在蛋白酶体中的作用.[方法]采用同源重组基因敲除技术、电转化、粗糙脉胞菌杂交、子囊孢子萌发及PCR鉴定等方法分别获得3个调节亚基的基因缺失突变体.利用racetube和平板生长法进行突变体表型检测.[结果]得到rpn4和rpn10的缺失突变纯合体及rpn7缺失突变异核体菌株.[结论]与野生型相比,rpn7~(KO)(ku70~(RIP) 背景)突变体的菌丝生长及产生分生孢子的能力显著减弱;rpn4~(KO)突变体在生长初期的菌丝生长缓慢,而后期的产孢能力与野生型无显著差异;rpn10~(KO)突变菌株的表型介于上述两种突变体的表型之间.这些结果表明26 S蛋白酶体的这3个亚基对脉胞菌的生长和发育至关重要.