NKCC1抑制剂布美他尼对大鼠脊髓原代少突胶质前体细胞增殖的影响

摘要

目的 研究钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脊髓原代少突胶质前体细胞(OPCs)增殖的影响及其机制.方法 振摇及差速贴壁法培养大鼠脊髓原代OPCs,使用NKCC1抑制剂布美他尼干预.免疫荧光法鉴定细胞及其NKCC1表达;EdU细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路蛋白p-p38,p-ERK,p-JNK表达.结果 免疫荧光实验显示纯化培养的OPCs 95％ 以上表达NG2+A2B5,且能分化为少突胶质细胞;OPCs 100％ 表达NKCC1.EdU结果显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,OPCs EdU阳性率增高[6 h:(9.00±0.39)％vs.(20.50±0.47)％,12 h:(10.33±0.33)％vs.(20.66±0.48)％,24 h:(11.30±0.34)％vs.(20.87±0.46)％,n=4,均P<0.01];流式细胞术结果显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,S期细胞比例增多[6 h:(10.57±0.48)％v s.(19.75±0.32)％,12 h:(10.38±0.54)％vs.(20.12±0.58)％,24 h:(10.53±0.55)％vs.(20.35±0.43)％,n=4,均P<0.01].Western blot检测显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,p-p38表达上升,p-ERK表达下降(均P<0.01),p-JNK无明显差异.结论 NKCC1抑制剂布美他尼促进脊髓原代OPCs增殖,其机制可能是通过上调p38/MAPKs信号通路,下调ERK/MAPKs信号通路来实现.