结直肠癌中miR-330-3p-RUVBL1信号轴对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

摘要

目的 探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中miR-330-3p-RUVBL1信号轴对肿瘤增殖、凋亡的影响.方法 分析Oncomine数据库中结直肠癌RUVBL1 mRNA的表达情况;利用Kaplan-Meier生存曲线分析RUVBL1 mRNA表达水平与CRC患者生存预后之间的相关性;免疫组化法检测临床CRC标本癌组织和正常结直肠组织RUVBL1蛋白的表达情况.荧光素酶报告基因实验分析RUVBL1与miR-330-3p的靶向关系;荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CRC临床标本癌组织和正常结直肠组织miR-330-3p的表达情况;利用脂质体转染结直肠癌HT-29细胞,过表达或沉默miR-330-3p的表达;运用CCK-8法检测过表达miR-330-3p对HT-29细胞活力的影响和对顺铂敏感性变化,利用流式细胞仪检测过表达miR-330-3p对HT-29凋亡的影响;利用Western blot检测转染miR-330-3p后HT-29细胞中RU-VBL1蛋白的表达情况和细胞凋亡相关蛋白的表达情况.结果 数据库分析结果显示RUVBL1 mRNA在CRC中高表达;RUVBL1基因的表达水平与结直肠癌患者生存预后之间存在相关性,RUVBL1高表达患者的总体生存率明显低于低表达RUVBL1的患者(P=0.0077);免疫组化结果显示RUVBL1在CRC组织中的表达水平较正常结直肠组织明显增高;qRT-PCR结果显示CRC临床标本癌组织中miR-330-3p的表达水平明显低于正常结直肠组织(P<0.01);过表达miR-330-3p的H T-29细胞中RU VBL1的表达明显下调,细胞内促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase-3的蛋白表达水平均上调,而Bcl-2表达水平下降;过表达miR-330-3p的HT-29细胞凋亡增加,且对顺铂的敏感性增强.结论 RUVBL1在CRC中高表达,其表达水平与CRC患者生存预后相关;RUVBL1是miR-330-3p的潜在靶点,miR-330-3p可能通过抑制RUVBL1表达促进结直肠癌细胞凋亡.