重组人骨形态发生蛋白-2/7融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和初步活性测定

摘要

构建重组人骨形态发生蛋白－２／７融合体， 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用ＤＮＡ 重组技术，将编码人骨形态发生蛋白－２ （ＢＭＰ－２） 成熟肽的０．３６ ｋｂ 基因片段与编码人骨形态发生蛋白－７ （ＢＭＰ－７） 成熟肽的０．４４ｋｂ 基因片段连接，得到重组人骨形态发生蛋白－２／７ 融合基因； 经测序鉴定后，将其克隆到表达载体ｐＢＶ２２２中，转化大肠杆菌ＤＨ５α， 温度诱导表达。表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小鼠成骨样细胞增殖、分化及碱性磷酸酶活性的影响。克隆质粒转化的工程菌，经４２℃诱导４～６ ｈ 后，高效表达重组人骨形态发生蛋白－２／７， 在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一新的蛋白带， 分子量约２９ ｋｕ，约占菌体总蛋白的２０％ ，表达蛋白以包涵体的形式存在，经初步纯化、裂解、复性后的ＢＭＰ－２／７ 蛋白具有促进成骨样细胞分化、增殖及增加碱性磷酸酶活性的作用。ＢＭＰ－２／７ 融合基因的构建和表达。