核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体的构建及功能研究

摘要

目的构建核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体,初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及药物敏感性的影响.方法通过RT-PCR技术获取XPD cDNA(2～667 bp)片段并反向插入真核7表达载体反义载体pcDNA3.1,采用脂质体法将构建的载体质粒转染肺癌细胞株A549,经G418筛选,采用抗肿瘤药物阿霉素、顺铂对细胞进行染毒干预,干预结果采用SCGE和MTT综合判定.结果转染细胞XPD mRNA表达受到抑制.单细胞凝胶电泳显示转染细胞DNA损伤修复能力降低.MTT法显示转染细胞药物敏感性增高.结论XPD反义RNA能降低肺癌细胞DNA损伤修复能力,其为核苷酸切除修复功能的研究提供了一个新的方式.