一种简便有效的枯草杆菌质粒克隆方法

摘要

目的在用枯草杆菌质粒克隆并表达白喉毒素突变型DT-del148时,出现A700T突变,导致Ile209Leu氨基酸取代,为纠正这一突变,设计一种简便有效的枯草杆菌质粒克隆方法.方法首先对含I209L突变的载体PSM604-DT-del148-I209L DNA进行计算机限制内切酶谱分析,以位于PflMⅠ及HindⅢ间的唯一切点的限制内切酶KpnⅠ消化,然后去磷酸化,热灭活相应酶,加入不含I209L突变的大肠杆菌质粒PET15b-DT-del148,再以PflMI、HindⅢ消化,浓缩后进行连接、转化、筛选克隆,最后DNA序列分析.结果经限制内切酶消化及序列分析,所有转化子均含目的基因片段.载体DNA仅需300 ng,转化效率达4.5×102转化子/μg;结论方法简便、有效、快捷,成本低、成功率高,值得推广和借鉴.