草鱼TP53INP1基因的克隆及微囊藻毒素对其表达的影响

摘要

为深入研究肿瘤蛋白p53诱导核蛋白1(Tumor protein 53-induced nuclear protein 1,TP53INP1)的结构及其在微囊藻毒素-LR(MC-LR)胁迫下的表达变化,以MC-LR诱导的草鱼(Ctenopharygodon idella)肝脏转录组测序获得的unigenes序列为基础,扩增获得了TP53INP1基因的cDNA序列(GenBank登录号:MG797689),其中开放阅读框(Open reading frame,ORF)为759 bp,编码252个氨基酸,属于β类型,具有4个PEST结构.氨基酸同源性分析结果表明,TP53INP1具有较高的保守性,其中与鱇浪白鱼(Anabarilius grahami)相似性最高.系统进化分析结果表明其与鱇浪白鱼(Anabarilius grahami)、斑马鱼(Danio rerio)等鱼类聚为一大支.采用荧光定量PCR分析发现TP53INP1基因在草鱼各组织中广泛分布,其中,在肝脏和血液等组织中表达丰富,显著高于在头肾组织中的表达(P<0.05).采用Western blot检测分析不同剂量(25、75和100μg MC-LR/kg BW)MC-LR染毒96h后对草鱼肝脏TP53INP1蛋白的影响,结果发现草鱼在100μg MC-LR/kg BW剂量组中染毒96h后表达显著下降(P<0.05),暗示TP53INP1可能在响应MC-LR胁迫中起着重要作用.研究为进一步了解TP53INP1的功能及为深入探讨TP53INP1在鱼类响应MC-LR胁迫后的作用机制提供了基础资料.