五步蛇毒血小板聚集抑制因子cDNA的克隆及表达

摘要

采用一步法抽提五步蛇毒腺总RNA, 通过RT-PCR扩增出低分子量金属蛋白酶酶原的cDNA, 克隆并测定了全序列.根据推导的氨基酸序列, 发现其中一个cDNA除编码一个低分子量金属蛋白酶外, 羧基端还包括一个血小板聚集抑制因子(称为acugrin), 这一结果证实了蛇毒金属蛋白酶和血小板聚集抑制因子起源于蛇毒金属蛋白酶酶原的前体.Acugrin与其他蛇毒来源的血小板聚集抑制因子具有一定的同源性, 有4对二硫键, 具有一个蛇毒血小板聚集抑制因子保守的结构域: RGD序列.将acugrin的cDNA克隆到pT7ZZa融合表达载体, 在大肠杆菌系统中得到融合表达, 融合蛋白具有较强的抑制ADP诱导的血小板聚集的活力, 半抑制剂量IC50为4 nmol/L.