转基因水稻T1C-1 Bt Cry1C基因的克隆、表达、纯化和实质等同性研究

摘要

将质粒pET30a(+)-Cry1C转入大肠杆菌进行表达,对其表达条件进行了优化,并评价了蛋白的表达和纯化效果.结果显示:最佳诱导时间、IPTG的终浓度和诱导温度分别为5 h、0.6 mmol/L和25 ℃.大多数的靶蛋白以包涵体形式表达,通过纯化和复性,最终获得高纯度有活性的靶蛋白.通过SDS-PAGE WesternBlot、糖蛋白测定、LC MS/MS鉴定和杀虫试验表明:大肠杆菌中表达的Cry1C蛋白和转基因水稻的Cry1C蛋白具有实质等同性.