黄曲霉毒素B1转化体外原代培养的大鼠肝上皮细胞

摘要

利用基因转染技术，研究黄曲霉毒素B1在人c-myc基因和p450IA2基因转染的基础上，转化体外原代大鼠脉上皮细胞的可能性及其部分分子机理。首先构建Xm-6／c-myc真核表达载体，并将其转染Alexander细胞，免疫组化实验证明重组的c-mvc基因可在肝细胞中表达。随后分别将c-myc和人p450IA2表达载体转染无血清原代培养的新生Wistar大鼠肝细胞，结果发现p450IA2基因可代谢活化5ng／ml的AFB1，并且在外源c-myc基因辅助下，诱导大鼠肝上皮细胞获得生长优势。其中随机挑选的1例在渡过长达4个月的“危机”期后，获得永生化生长能力。从CK-18和大鼠白蛋白的表达情况和细胞超微结构特征，明确了转化细胞来源于肝上皮细胞。核型分析、免疫组化和Northern杂交分析提示，大鼠肝上皮细胞转化与其基因组稳定性改变和TGFα高表达相关。