人apoE7基因在NIH/3T3细胞中瞬时及稳定表达

摘要

目的为了探索人apoE7基因受控于异源启动子MT-Ⅰ时,能否在鼠类细胞中表达.方法自10.3kb人apoE7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE7基因组DNA片段(6.0kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(MT-Ⅰ)重组,构建pME7真核表达质粒,用Lipofectamine转染NIH/3T3细胞.结果瞬时表达结果表明,重组pME7质粒能够在NIH/3T3细胞中表达.稳定表达的结果则表明,人apoE7基因的表达水平与其整合到宿主细胞基因组的拷贝数密切相关.ELISA测定结果显示,人apoE7基因在NIH/3T3细胞中可以进行正确的转录剪切和翻译加工,合成有生物活性的人apoE7蛋白;研究结果还表明:重金属可以诱导增强人apoE7基因的高效表达,诱导后表达水平提高45%～60%.结论人apoE7基因的表达不仅局限于人类的组织细胞,也可以在鼠类组织细胞中表达;而且MT-Ⅰ启动子能够诱导表达人apoE7基因,为人apoE7转基因小鼠模型的建立奠定了基础.