应用绿色荧光研究人抑瘤素基因在CHO细胞中的表达

摘要

目的:建立一种简易、快速检测细胞内外源性基因稳定表达的方法。方法:以携带绿色荧光蛋白的真核表达质粒pEGFP-N1为骨架,将完整的hOSM基因ORF克隆到pEGFP-N1上游的多克隆位点,构建表达载体pOSM-EGFP-N1,脂质体介导转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),G418筛选,挑选阳性克隆。荧光显微镜、流式细胞术分析转染了pOSM-EGFP-N1质粒的CHO细胞纯度。RT-PCR的方法分析OSM基因水平表达。结果:成功建立稳定表达OSM的CHO细胞株(CHO-OSM-EGFP),纯度达到99.76%,且OSM基因在CHO-OSM-EGFP细胞中稳定表达。结论:构建了携带绿色荧光、表达OSM的pOSM-EGFP-N1质粒转染的CHO细胞,只通过荧光显微镜观察和FCM检测细胞绿色荧光,即可明确OSM转染成功。为表达外源性基因阳性细胞的筛选提供了简易的方法。