鼻咽癌CNE1细胞株中EB病毒LMP1 cNDA的克隆及LMP1胞外段稳定性研究

摘要

目的:克隆鼻咽癌细胞株CNE1中EBV-LMP1 cDNA,载入质粒载体pGEM中,并检测CNE1细胞株LMP1胞外肽段表达的稳定性.方法:运用免疫组化的方法检测CNE1细胞潜伏膜蛋白(LMP1)的表达情况,通过RT-PCR技术从CNE1细胞中扩增EBV-LMP1基因全长,并载入质粒载体pGEM,转化JML09菌.提取质粒,利用引物上的BamH1与Hind3酶切位点限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳鉴定.扩增CNE1细胞中含有LMP1三段胞外段的序列并测序.结果:免疫组化显示CNE1细胞高表达LMP1,扩增的LMP1 cDNA长度为1158 bp,测序结果与已知序列有部分变异.连续传代的CNE1细胞LMP1胞外段表达稳定.结论:成功克隆了EBV-LMP1 cDNA,并载入质粒载体,证实LMP1胞外段表达稳定,为研究LMP1在鼻咽癌致病机制中的作用,并进一步研制LMP1胞外段特异性单克隆抗体,为其在鼻咽癌放疗靶区功能显像的研究中奠定基础.