树突状细胞的TSC1对抗原非特异性初始T细胞活化和增殖的作用机制

摘要

本文主要从以下几部分进行论述：
　　课题1 树突状细胞的TSC1对T细胞活化和增殖的作用机制
　　背景：树突状细胞(dendritic cells，DCs)是一种诱导T细胞活化和增殖反应的重要细胞。结节性硬化物1(tuberous sclerosis complex1，Tsc1)是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）上游重要的负调节因子。最近的研究突出Tsc1在树突状细胞的发育方面的作用，但是在体内Tsc1是否直接调节或者怎么调节成熟树突状细胞对T细胞活化增殖作用的机制还不是很明晰。
　　目的：本实验主要研究稳态下成熟树突状细胞表达的Tsc1对T细胞活化增殖作用的机制。
　　方法：(1)Tsc1f/f小鼠和CD11cCre转基因小鼠杂交来建立特异性敲除树突状细胞中Tsc1的小鼠(CD11cCrsc1f/f)系统，普通PCR和westernblot分别在基因水平和蛋白水平检测Tsc1基因是否敲除。(2)流式细胞术检测T细胞的活化、Ki67表达和细胞因子的表达。(3)应用体外树突状细胞-初始T细胞共培养系统，流式细胞术检测阻断或不阻断Nrp1时T细胞增殖;流式细胞术检测树突状细胞中Nrp1的表达。(4)流式细胞仪检测树突状细胞主要信号通路的激活和变化;流式细胞术检测树突状细胞胞内S6K磷酸化水平、Nrp1表达水平和T细胞的活化比例。
　　结果：(1)成功建立了Tsc1基因敲除小鼠，Tsc1在基因水平和蛋白水平均被敲除。(2)Tsc1基因敲除后与对照组相比，脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞活化增加，脾脏中初始CD4+T细胞和CD8+T细胞的细胞数随年龄增加而减少，T细胞细胞增殖增加和细胞因子表达升高。(3)Tsc1基因敲除后与对照组相比，树突状细胞诱导的初始T细胞增殖是增加的，树突状细胞中表达大量的Nrp1，阻断Nrp1，可以部分抑制由Tsc1敲除的树突状细胞启动的初始CD4+T细胞的活化。(4)Tsc1基因敲除后与对照组相比，S6K和PPAR-γ的活化明显增加;在CD11cCreTsc1f/f Raptorf/+小鼠树突状细胞中Nrp1表达及T细胞活化的表型被极大地挽救，mTORC1的过度表达被降低;抑制PPAR-γ，可以使Tsc1敲除的树突状细胞中Nrp1的表达降低。
　　结论：(1)成功建立了Tsc1基因敲除小鼠CD11cCreTsc1f/f;(2)树突状细胞的Tsc1基因可以防止体内自发的T细胞活化;(3)在树突状细胞中Tsc1通过抑制Nrp1表达来阻止初始T细胞的增殖;(4)Tsc1通过阻止mTORC1-PPAR-γ信号通路来抑制Nrp1的表达。
　　课题2 TGF-β刺激对小鼠脾脏树突状细胞功能的影响
　　目的：探索转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)通过调节树突状细胞(dendritic cells，DCs)的功能从而抑制CD4+T细胞增殖活化的可能作用机制。
　　方法：应用CD11c+免疫磁珠分选小鼠脾脏DCs，并检测其纯度。TGF-β处理DCs后，进行基因芯片检测。实时定量PCR验证基因芯片结果。DCs经TGF-β处理后和CD4+T细胞共培养，流式细胞术检测CD4+T细胞的活化和增殖。
　　结果：CD11c磁珠分选DCs纯度可以达到95％。TGF-β处理DCs后，抑制DCs表面CD53、CD69、CD33、CD74、CD93分子的表达;抑制趋化因子Ccl3、Ccl5、Ccl9、Ccl6、Ccl17、Cxcl10、Ccl22、Ccl4、Ccr7、Ccl2、Cxcl9、Ccr7的表达;抑制IL-2ra、IL12-rb2、IL-15ra、IL-1b、IL-15炎性细胞因子及其受体的表达;抑制CD4+T细胞的增殖和活化。
　　结论：TGF-β可以抑制DCs部分重要的表面CD分子、趋化因子及其受体、细胞因子及其受体的表达，最终抑制CD4+T细胞的促活化和增殖。

目录

课题1 树突状细胞的TSC1对T细胞活化和增殖的作用机制

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

课题2 TGF-β刺激对小鼠脾脏树突状细胞功能的影响

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

综述：树突状细胞基本的生物学功能

附录

致谢

声明