实验性视神经炎小鼠模型的建立及NFG对其保护作用的实验研究

摘要

目的：
　　 1、建立以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)多肽诱发的实验性视神经炎小鼠模型。
　　 2、通过动态监测闪光视觉诱发电位(f-VEP)和闪光视网膜电图(f-ERG)并结合病理学方法研究小鼠实验性视神经炎发病过程中视觉功能的变化
　　 3、研究NGF对实验性视神经炎小鼠视网膜神经组织的保护作用
　　 方法：
　　 1、应用MOG35-55多肽加完全弗氏佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠(50只)建立实验性视神经炎模型，CON组和EAE组小鼠于免疫后的不同时间点进行f-VEP和f-ERG检查，初步应用f-VEP的改变来诊断视神经炎。
　　 2、EAE组小鼠和CON组小鼠于p.i.7d、p.i.14d、p.i.20d、p.i.30d对视神经采用HE染色、Luxol fast blue染色、Bielschowsky银染分别评估炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴突病理改变；并在电镜下观察视神经超微结构的变化.使用TUNEL法检测视网膜神经节细胞凋亡并计算其凋亡指数。
　　 3、40只小鼠随机分为BSS+EAE组和NGF+EAE组.NGF+EAE组给予玻璃体注射NGF，BSS+EAE组玻璃体注射BSS液，于p.i.7d、p.i.14d时对两组小鼠进行f-VEP和f-ERG检查；采用HE染色、Luxol fast blue染色、Bielschowsky银染分别评估视神经炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴突病理改变；使用TUNEL法检测视网膜神经节细胞凋亡并计算其凋亡指数。
　　 结果：
　　 1、本实验应用MOG35-55多肽加完全弗氏佐荆皮下注射免疫正常C57BL/6小鼠，以眼计算，60％眼f-VEP发生改变，视神经炎发病率为57.5％(病理诊断)，大部分为双眼发病，左右眼无明显差异。
　　 2、EAE组小鼠建模前f-VEP和f-ERG与CON组比较无显著性差异，本实验对不同时间点的电生理改变眼的结果进行了统计：在p.i.7d，EAE组小鼠f-VEP和f-ERG各波潜伏期和幅值与CON组比较差别有显著性意义(P<0.05).在p.i.14d，EAE组小鼠f-VEP和f-ERG各波和p.i.7d比较有显著性差异(P<0.01).在p.i.20d和p.i.30d，电生理结果与CON组比较差别有统计学意义(P<0.01)，但并没有恢复趋势。
　　 3、在p.i.7d，光镜下观察EAE组视神经HE染色和Bielschowsky银染与CON组无明显改变；Luxol fast blue染色可见髓鞘排列紊乱；电镜下可见髓鞘断裂分层，与轴突分离；TUNEL检测EAE小鼠视网膜神经节细胞无明显凋亡，在p.i.14d，视神经呈现不同程度的炎性浸润、髓鞘脱失和轴突损害；电镜下可见不同程度的髓鞘板层状分离、变薄、脱失，轴索水肿，线粒体明显肿胀；TUNEL检测EAE组已有明显的RGCs凋亡，与CON组比较有显著性差别(P<0.01)，在p.i.20d和p.i.30d时，光镜下视神经的脱髓鞘程度并没有减轻.凋亡指数随着病程的延长而增高。
　　 4、NGF+EAB组小鼠的体重和临床评分与BSS+EAE组比较无显著性差异(P>0.05).在p.i.7d，NGF+EAE组f-VEP和f-ERG各波幅与BSS+EAE组相比无显著性差异(P>0.05)；TUNEL检测两组均无视网膜神经节细胞凋亡.在p.i.14d，BSS+EAE组f-ERG b波潜伏期与BSS+EAE组有显著性差异(P<0.05)；TUNEL检测NGF+EAE组小鼠视网膜神经节细胞凋亡指数低于BSS+EAE组，差异有显著性意义(P<0.05)。
　　 结论：
　　 1、以MOG35-55为抗原诱发的视神经炎模型发病率高，容易复制，病理改变接近于特发性脱髓鞘性视神经炎，是研究IDON的理想模型.病理检查发现视神经脱髓鞘的同时伴有RGCs凋亡和轴突的损伤。
　　 2、f-VEP可用来筛选和初步诊断实验性视神经炎和评估病情的严重性；可作为研究视神经炎药物疗效的评价指标。
　　 3，本研究提示NGF对视神经炎小鼠视网膜神经组织有一定的保护作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

第一部分：实验性视神经炎小鼠模型的建立及其病程中视神经、视网膜形态结构和功能变化的研究

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图一

第二部分：NGF对实验性视神经炎视网膜神经组织的保护作用

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图二

综述：特发性脱髓鞘性视神经炎及基础研究概况

致谢

攻读学位期间发表的论文