血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对脂肪组织和脂肪细胞糖脂代谢及炎症因子的影响

摘要

高血压、糖尿病、脂质代谢紊乱和肥胖常常簇集出现而形成代谢综合征，严重影响到公众的健康水平。脂肪细胞可以产生和分泌促炎因子如TNFα、IL-1β和IL-6，很多肥胖相关的疾病状态与这些促炎因子等的不适当分泌有关。
　　 高血压和肥胖患者患2型糖尿病的风险增加。近期临床试验表明，阻断肾素-血管紧张素系统(RAS)可能对这一高风险人群具有一定的保护作用。RAS系统组分存在于脂肪组织和脂肪细胞，因此脂肪组织和细胞可能成为血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)的作用靶点。
　　 基于以上背景，本研究通过动物实验和细胞实验研究ARBs对于脂肪组织和细胞本身糖脂代谢以及分泌炎症因子的影响，并对作用机制进行了初步探讨。
　　 目的:观察血管紧张素II受体拮抗剂(Angiotensin II type1 receptorblockers，ARBs)对于脂肪组织和细胞糖脂代谢以及分泌炎症因子的影响以探讨ARBs改善胰岛素抵抗的机制。
　　 方法：
　　 1.动物实验：以Wistar雄性大鼠为研究对象，应用坎地沙坦酯(Candesartan，8mg/kg·d)对高脂饲养的Wistar大鼠进行为期4周的干预，用正葡萄糖钳夹试验比较干预组(高脂+坎地沙坦组，HF+C组)和非干预组(单纯高脂，HF组)的胰岛素敏感性，同时留取血清检测各组动物血糖、血脂、胰岛素以及促炎因子IL-1β、IL-6和TNFα的水平，并对干预后各组体重、肾周和附睾脂肪组织含量进行检测；
　　 2.细胞实验：以3T3-L1细胞株为研究对象，1)MTT法检测不同浓度Telmisartan对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。2)应用替米沙坦(Telmisartan)以及联合PPARγ拮抗剂GW9662对3T3-L1细胞分化的早期(分化开始12h，24h)进行干预，倒置显微镜下以及油红0染色定量分析Telmisartan对于前脂肪细胞分化和分化过程中成脂作用的可能影响以及应用Q-PCR(Realtime QuantitativePCR)检测Telmisartan干预下3T3-L1分化过程中的PPAR Y mRNA表达情况；3)应用不同浓度Telmisartan(0.01-10 ug/ml)处理诱导成熟的3T3-L1脂肪细胞，通过检测脂肪细胞18F-FDG摄取、培养液中游离脂肪酸(FFA)、IL-1β、IL-6和TNFα，观察Telmisartan对于成熟脂肪细胞糖脂代谢以及炎症因子分泌的影响；4)为进一步明确机制，利用高通量的基因表达谱芯片对替米沙坦引起的3T3-L1脂肪细胞差异基因表达进行筛选和分析，筛选的部分基因由Q-PCR进行验证。
　　 结果：
　　 1.动物实验结果：1)Candesartan干预的高脂喂养大鼠(HF+C)组体重、肾周和附睾脂肪量均较HF组显著降低(体重478±35g vs518±28g，P<0.01；肾周脂肪20±4g vs26±4g，P<0.01；附睾脂肪9.6±1.8g vs11.5±2.Og，P<0.05)，空腹血糖差异无统计学意义(P>0.05)；2)HF+C组血浆炎症因子IL-6、TNFα水平较HF组也显著降低(IL-6分别为54.03±13.32pg/ml和85.35±16.93pg/ml，P<0.05； TNFα分别为33.18±5.51pg/ml和48.20±7.87g/ml，P<0.05)，IL-1β在HF组和HF+C组差异无显著意义(41.04±10.12pg/ml vs29.72±7.66 pg/ml，P>0.05)；3)正葡萄糖钳夹试验表明，两组的葡萄糖输注率(GIR)存在显著差异，HF+C组GIR显著高于HF组(22.4±5.12mg/kg·min vs13.54±3.92 mg/kg·min，P<0.05)；
　　 2.细胞实验结果表明：1)MTT法检测表明，浓度为0.01-1.0 ug/ml的Telmisartan对于3T3-L1前脂肪细胞的增殖无显著影响；2)3T3-L1细胞的分化的早期(诱导起始12h和24h)应用Telmisartan(0.1ug/ml)干预可以促进细胞的分化以及分化过程中的脂质聚集，同时Realtime PCR显示Telmisartan可增加诱导过程中PPARγ基因的表达增高(在诱导的第3天和第6天分别增加2.51倍和1.46倍)；3)对诱导成熟3T3-L1脂肪细胞进行干预，Telmisartan可以呈剂量依赖的降低细胞脂质含量，增加18F-FDG摄取。同时，Telmisartan可以降低培养液中IL-6和TNFα的分泌，增加培养液中FFA的含量。基因芯片结果筛选157个差异表达基因或基因片段。这些基因涉及细胞内脂质代谢和转运、细胞的分化以及氧化应激和炎性途径，这些途径介导了Telmisartan发挥调节细胞脂质代谢和炎症因子分泌的作用。另外，Nos3(内皮型一氧化氮合酶基因)和CPTIA(肉碱脂酰转移酶-1α基因)基因表达的改变可能介导了Telmisartan发挥调节细胞糖脂代谢的作用。
　　 结论：
　　 1)Candesartan可以减少高脂喂养大鼠的体重和脂肪组织，降低血清炎症因子水平，改善大鼠糖、脂代谢；
　　 2)Telmisartan可以促进前脂肪细胞向脂肪细胞的转化，促进成熟脂肪细胞糖摄取，减少成熟脂肪细胞脂质含量，这种对于脂肪细胞的直接作用可能是由细胞炎性途径以及脂肪酸代谢途径所介导的。提示某些ARBs对动物机体以及脂肪组织和脂肪细胞本身的糖脂代谢有重要影响。

目录

文摘

英文文摘

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声明

引 言

1.摘 要

2.前 言

3.材料方法

4.结 果

5.讨 论

6.结 论

参考文献

1.摘 要

2.前 言

3.研究内容

3.2 Telmisartan对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程的影响

4.讨 论

5.结 论

参考文献

1.摘 要

2.前 言

3.材料方法

4.结 果

5.讨 论

结 论

参考文献

第四部分 全文总结和展望

个人简历

致 谢