HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞高表达TRAIL与肝损伤关系的研究

摘要

目的：慢性乙型肝炎的肝损伤是由免疫介导的，以往认为获得性免疫应答（特别是特异性CTL反应）是造成肝损伤的主要机制，然而天然免疫系统，NK细胞表达TRAIL与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者肝损伤的关系尚不清楚，为此我们开展相关研究。
　　 方法：收集54例ALT升高的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者、16例ALT正常的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者及36例健康对照外周血，分离和培养外周血单个核细胞，采用流式细胞仪鉴定细胞表型，利用CD56+细胞纯化试剂盒纯化NK细胞，荧光抗体染色，测定NK细胞TRAIL表达水平，K562细胞用于测定NK细胞自然杀伤功能，HepG2细胞用于测定NK细胞杀伤肝癌细胞功能。体外和体内IFNα处理对NK细胞功能的影响和TRAIL表达的变化。
　　 结果：HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞亚群CD56bright频率较免疫耐受期患者和健康对照明显增加（p值分别为0.01和0.007），NK细胞表达TRAIL明显增高，二者均与ALT变化呈正相关（R=0.46，p<0.001；R=0.52，p=0.03），NK细胞自然杀伤功能和杀伤肝癌细胞功能比免疫耐受期患者和健康对照明显增强（p值均<0.05），TRAIL参与了肝癌细胞杀伤试验。IFNα在体外和体内均可上调NK细胞TRAIL表达，促进NK细胞活化。
　　 结论：NK细胞高表达TRAIL可能与HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者肝细胞损伤有关，临床上使用IFNα抗乙型肝炎病毒治疗可能通过上调NK细胞表达TRAIL，增强NK细胞的免疫功能。

目录

文摘

英文文摘

前 言

对象和方法

1.研究对象

2.主要试剂

3.主要仪器

4.实验方法

4.1 外周血单个核细胞分离及培养

4.2 细胞表型的流式鉴定

4.3 CD56+NK细胞纯化

4.4 CFSE标记及免疫细胞

4.5 NK细胞自然杀伤功能检测

4.6 杀伤HepG2等靶细胞实验

4.7 细胞处理方法及抗体阻断实验

4.8 统计学处理方法

结 果

1.慢性乙型肝炎患者外周血总NK细胞和NK细胞亚群数量变化

2.慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞TRAIL表达水平变化

3.慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞杀伤肝癌细胞能力

4.体外IFNα处理对慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞表达TRAIL的影响

5.体内IFNα治疗后慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞比率和NK细胞表达TRAIL的变化

讨 论

结 论

参考文献

文献综述

参考文献

缩略词表

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