凋亡抑制蛋白XIAP在肝癌细胞化疗耐药中的作用研究

摘要

目的：研究X染色体连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein）基因及蛋白表达水平对不同剂量5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-Fu）诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响，为改善肝癌治疗的现状提供新的思路。
　　 方法：澳大利亚Latrobe大学Vaux教授惠赠含XIAP基因全长的真核表达载体pef-XIAP后进行质粒的回收、扩增并使用PCR及双酶切方法鉴定。鉴定质粒可用后，采用脂质体介导转染方法将pef-XIAP质粒转染人肝癌细胞HepG2中，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及western Blotting检测XIAP基因和蛋白表达水平。转染成功后，通过不同浓度5-Fu诱导细胞凋亡，使用CCK-8试剂通过比色法分析检测5-Fu对转染pef-XIAP的HepG2细胞与对照组细胞生长活性的抑制作用。
　　 结果：1、获取质粒经双酶切及PcR检测均呈现特异性单一条带，证明质粒可用。2、RT-PCR检测XIAP基因表达显示转染pef-XIAP的HepG2细胞XIAP表达量明显提高，与对照组细胞相比有显著性差异（P<0.05）。3、western Blotting检测XIAP转染pef-XIAP的HepG2细胞XIAP蛋白表达明显增高与对照组细胞相比有显著性差异（P<0.05）。4、在10ppc、1ppc、0.1ppc浓度5-Fu作用下实验组细胞生长抑制率明显低于对照组（P<0.05）。
　　 结论：1、通过分子生物学基因工程手段可明显提高HepG2细胞XIAP基因及蛋白表达。2、XIAP基因在人肝癌细胞HepG2中的高表达可以明显降低化疗药物5-Fu诱导的细胞凋亡，其在肝癌化疗耐药中发挥一定作用。

目录

文摘

英文文摘

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前言

材料与方法

1、试验材料

1.1 细胞与质粒

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2.试验方法

2.1 pef-XIAP质粒的回收与鉴定

2.2 转染pef-XIAP质粒HepG2细胞的XIAP基因表达检测

2.3 转染pef-XIAP质粒HepG2细胞的XIAP蛋白表达检测

2.4 CCK-8法检测不同浓度5-Fu对HepG2细胞抑制作用

2.5 统计学处理方法

结果

1.质粒鉴定：

1.1 质粒舣酶切鉴定

1.2 质粒PCR鉴定

2.XIAP表达检测

2.1 HepG2细胞总mRNA纯度及完整性检测

2.2 转染pef-XIAP质粒对细胞XIAP mRNA表达的影响

2.3 转染pef-XIAP质粒对细胞XIAP蛋白表达的影响

3.5-Fu对HepG2细胞的生长抑制作用

讨论

全文小结

参考文献

文献综述

参考文献

攻读学位期间发表文章情况

致谢