替莫唑胺脑靶向药物组合在胶质瘤模型中的应用

摘要

第一部分 Wistar大鼠C6胶质瘤模型的建立
　　目的:通过立体定位技术建立大鼠 C6胶质瘤模型。观察大鼠成瘤后的生长状态、生存期、病理变化等。确立大鼠脑胶质瘤模型建立的有效方法,提高成瘤率,为进一步的实验研究提供基础。
　　材料和方法:雄性Wistar大鼠135只,体重200-300g,应用大鼠立体定位仪,将大鼠 C6胶质瘤细胞进行体外培养后接种于鼠脑右侧尾状核头,接种细胞量为1-2×106/10μl/只。接种第5天进行磁共振扫描检测成瘤率。
　　结果:接种中意外死亡5只,接种后第1、2天意外死亡8只,98只大鼠磁共振扫描可见肿瘤生长,存活大鼠成瘤率为80.3％。各组大鼠接种后皮毛失去光泽,活动量减少,食物和水的摄入减少,并有腹泻等症状;接种2周后部分大鼠开始出现体重减轻,偏瘫,鼻出血、眼周淤血等症状;第3周后症状明显加重,开始出现据食水等现象,接种后第2周末开始发生死亡,至第60天全部死亡。
　　结论:C6胶质瘤模型的建立方法基本上比较成熟,成瘤率较高,可以满足大规模的实验研究。为尽可能的提高成瘤率,细胞株选择和培养是关键。原代的胶质母细胞瘤细胞,可以较好的保证细胞的抗原性。细胞培养方面,要选用对数生长期的细胞进行种植,细胞生长活跃,更利于胶质瘤模型的建立。动物麻醉掌握好剂量,避免麻醉过量引起动物死亡。接种肿瘤细胞要严格无菌操作,避免移植感染。
　　第二部分替莫唑胺脑靶向药物组合在大鼠胶质瘤模型中的疗效评价
　　目的:制备替莫唑胺(temozolomide,TMZ)脑靶向药物组合,并通过MRI、生存期观察和病理学改变初步评价其在大鼠C6胶质瘤模型的治疗效果。
　　材料和方法:随机选取术后第5天经MR检测确认的成瘤大鼠72只,随机分为6组,1-6分别为:空白组、静脉注射TMZ组、口服TMZ组和经鼻腔脑靶向药组低、中、高剂量组,每组12只。分别用生理盐水、TMZ静脉注射、灌胃以及脑靶向药物组合低、中、高剂量对大鼠C6胶质瘤模型治疗后, MR检查大鼠的肿瘤体积变化,观察大鼠生存期和病理学的改变。
　　结果:Wistar大鼠均得到了清晰的MRI影像。1-6组各组在治疗前后的体积增长值分别为66.25±9.18 mm3,35.08±4.16 mm3,37.17±5.36 mm3,11.17±1.28 mm3,18.0±2.39 mm3,and11.33±2.49 mm3,各组间差异有统计学意义,各组TMZ治疗均有效(P=0.001),静脉注射和口服TMZ组未见明显差异(p=0.861),各剂量TMZ脑靶向药物组合无明显差异(p=0.067),低剂量TMZ脑靶向药物组合治疗后肿瘤体积增长明显低于静脉注射TMZ组(P=0.034)和口服TMZ组(P=0.035),提示脑靶向药物组合能抑制肿瘤的生长。1-6组的中位生存期分别为21.5 d,18.5 d,21.5 d,37.5 d,45.5 d,和30.0 d,3组脑靶向药物组合的生存期无统计学差异(P=0.642),但明显较其他三组延长(以低剂量组为例, P=0.001, P=0.02, P=0.02)。HE染色证实各组大鼠均接种了胶质瘤,TMZ脑靶向药组较其他各组PCNA表达减少,TUNEL凋亡增加。
　　结论:TMZ脑靶向药物组合能抑制胶质瘤肿瘤细胞的生长,延长动物的生存期,或许可以作为治疗胶质瘤新的有效剂型, TMZ脑靶向药物组合的研究对于人类脑胶质瘤的治疗有良好前景。
　　第三部分定量磁共振动态增强扫描对替莫唑胺脑靶向药物组合治疗大鼠胶质瘤的初步评价
　　目的:通过大鼠C6脑胶质瘤模型经TMZ脑靶向药物组合治疗前后对照,探讨脑胶质瘤磁共振灌注成像的动态量化研究的可行性及价值。并进一步证实TMZ脑靶向药物组合的治疗效果。
　　材料和方法:随机选取10只大鼠建立胶质瘤大鼠模型,术后第5天进行磁共振扫描,序列包括T1map和T1动态增强扫描。发现一只大鼠未成瘤。结束后从其余大鼠中随机选取两只处死、取脑并固定。术后第6天经鼻腔给予TMZ脑靶向药物组合治疗,给药剂量为4mg/kg/d,连续5天。术后第11天重复进行磁共振动态增强扫描后随机处死治疗后的大鼠2只并取脑固定。Image J后处理软件处理图像数据资料,得到Ktrans伪彩图和FV伪彩图,计算肿瘤Ktrans值和Vp值,并进行统计学分析。治疗前后各2只大鼠标本进行 HE染色和VEGF免疫组化。
　　结果:计算出治疗前后的ktrans值均数分别为0.103±0.058/min,0.042±0.031/min。利用配对t检验,证明治疗前后ktrans值的差别有统计学意义(P=0.027)。Vp值均数分别为0.210±0.126/min,0.136±0.058/min,治疗前后 Vp值的差异无明显统计学意义(p=0.117)。HE染色显示治疗后细胞密度减低,VEGF染色治疗组肿瘤细胞胞浆阳性率小于非治疗组。
　　结论: TMZ脑靶向药物抑制肿瘤血管生成,其治疗以后 ktrans值减小,二者改变相符,说明ktrans值能在一定程度上反应肿瘤血管的通透性,脑胶质瘤磁共振灌注成像的动态量化研究是可行的。病理、免疫组化及ktrans值都进一步证实了TMZ脑靶向药物治疗胶质瘤的有效性。

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前言

参考文献

第一部分大鼠C6脑胶质瘤模型的建立

一、材料

二、方法

三、结果

小结

参考文献

第二部分 替莫唑胺脑靶向药物组合在大鼠胶质瘤模型中的药效评价

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

小结

参考文献

第三部分 定量磁共振动态增强扫描对替莫唑胺脑靶向药物组合治疗大鼠胶质瘤的初步评价

一、材料

二、方法

三．结果

四．讨论

小结

参考文献

综述

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