牙周膜干细胞分离、鉴定及其用于牙周组织工程化再生的实验研究

摘要

牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)属成体干细胞,2004年由Seo等首次提出.其主要特征是在一定条件下能分化、形成牙周膜、牙槽骨和牙骨质,这使其成为牙周再生治疗首选的种子细胞.目前对PDLSCs的研究尚处起步阶段,诸多方面缺乏较为深入全面的研究。本课题以PDLSCs为研究对象,在深入探讨其生物学特性的基础上,将其用于牙周再生治疗,以期为牙周、种植体周生物再生治疗提供新思路,新方法。
　　 研究的主要内容和结果如下:
　　 1.采用免疫磁珠法成功分离了人和犬PDLSCs并鉴定.通过流式细胞仪、透射电镜、免疫荧光等技术较为系统地探讨了PDLSCs生物学特性。
　　 2.成功诱导PDLSCs向成骨、成脂肪细胞方向分化.分别从细胞、蛋白、基因水平等对诱导细胞的形态、结构、功能变化进行了动态检测和分析,为全面认识和鉴定PDLSCs奠定了基础。
　　 3.优选出适合PDLSCs生长的生物支架材料。分别将PDLSCs与胶原凝胶,脱细胞真皮基质(ADM),羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP),纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)复合,通过组织学、扫描电镜、RT-PCR、Western blot等方法分析其与材料的相容性,结果表明ADM、nHAC/PLA分别是附着龈、牙槽骨组织工程的适宜支架材料。
　　 4.用PDLSCs-支架复合体行体内移植,有效地再生治疗了犬附着龈缺损和牙槽脊缺损。首先通过组织学、骨形态计量分析、细胞示踪等方法确定了PDLSCs-nHAC/PLA成骨作用、PDLSCs-ADM附着龈再生能力。然后采用PDLSCs-ADM+PDLSCs-nHAC/PLA联合移植重建犬牙周缺损,经牙周测量、x-线和组织学观察等分析,结果表明该法是附着龈、牙槽嵴缺损的修复重建治疗的有效途径。