抗幽门螺杆菌三联疗法联合益生菌治疗对肠道菌群影响的研究

摘要

【背景】
　　幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori)是消化性溃疡的最常见也是可治愈的病因,目前共识指南强烈推荐检测并治疗消化性溃疡患者的H. pylori感染。质子泵抑制剂+克拉霉素+阿莫西林的标准三联根除H. pylori疗法在世界范围内广泛应用,但是根除H. pylori疗法可能有很多不良反应并影响肠道菌群进而影响人类健康。而适当添加益生菌制剂则可能减少不良反应及肠道菌群紊乱的发生。
　　【目的】
　　在标准三联疗法基础上辅助应用枯草杆菌、屎肠球菌二联活菌肠溶胶囊,初步探讨益生菌制剂降低三联疗法不良反应的疗效;探讨标准三联疗法及联合应用益生菌疗法在根除H.pylori治疗前及治疗后肠道菌群多样性的变化,研究益生菌是否能够改善肠道菌群。
　　【方法】
　　自2012年10月至2013年11月共纳入40例存在H.pylori感染且无并发症的活动期DU患者,随机分为标准三联治疗组(Triple treatment,TT)和标准三联加益生菌治疗组(Triple treatment+probiotic,TP),并纳入20例正常健康人作为空白对照组(Health control,HC)。TT组口服2周埃索美拉唑(20mg, bid)、克拉霉素(0.5g,bid)和阿莫西林(1g,bid);TP组口服2周埃索美拉唑(20mg,bid)、克拉霉素(0.5g,bid)和阿莫西林(1g,bid),同时口服6周枯草杆菌屎肠球菌二联活菌胶囊(0.5g,tid)。记录患者治疗前、中、后的临床症状及不良反应情况,在治疗后4周复查胃镜及13C-呼气实验。于治疗前(第0周)、治疗结束时(第2周)、治疗后4周(第6周)和8周(第10周)留取大便标本并提取细菌DNA,利用PCR方法提取16S rDNA V4区序列,通过Illumina Miseq高通量测序平台测序分析肠道菌群多样性变化。
　　【结果】
　　DU在中青年男性中高发,DU时胃液 pH值(0.72)较正常人(1.27)明显降低,行抗H.pylori治疗后胃液pH均能恢复正常。TT组和TP组的溃疡愈合率(90％vs100%)和H.pylori根除率(80%vs85%)无差异。TT组不良反应发生率高于TP组(35% vs20%,P<0.05),主要症状是腹泻、恶心、腹痛、味觉障碍、腹胀、纳差和便秘,多数发生在治疗期间,85.7%为轻中度,所有患者均可耐受治疗。TP组能够显著改善临床症状、提高治疗耐受性并降低不良反应发生率,尤其是腹泻的发生率较TT组明显下降。16S rDNA测序分析发现HC组平均OTUs为875,TT组平均为635,TP组平均为725。在门水平上,TT组占总数0.1%以上的共注释到10个门,TP组为9个门;在属水平上,TT组占总数1%以上的共有10个属,TP组共有12个属。尽管菌群所占比例不同,两组的优势菌门相同,都是Bacteroidetes、Firmicutes和Proteobacteria,占据总菌量的96%。两种治疗方法的优势菌属不全相同,比例全不同。TT组前5位是Bacteroides(30.3%)、Escherichia(14.9%)、Prevotella(10.7%)、Faecalibacterium(6.0%)、Parabacteroides(2.6%);TP组前5位是 Bacteroides(27.1%)、Escherichia(10.0%)、Faecalibacterium(6.8%)、Prevotella(5.2%)、Phascolarctobacterium(3.7%)。抗H.pylori治疗2周可以导致肠道菌群多样性降低,尤其是Firmicutes;停药4周时两组均有恢复至治疗前水平的趋势;停药8周时TT组未再变化,而TP组继续恢复至接近于正常人水平。
　　【结论】
　　TP疗法能够降低TT疗法的不良反应发生率。DU时患者肠道菌群多样性降低,抗H.pylori治疗导致菌群多样性继续下降,停药4周时肠道菌群有恢复趋势,且TP组恢复肠道菌群结构方面优于TT组。

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中文摘要

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前言

1. 人体胃肠道微生态概况

2. 三联抗H.pylori疗法联合益生菌治疗对人体微生态的作用

3. 相关基因高通量测序技术的研究

正文

一、材料和方法

1. 研究对象

2. 研究方案

3. 实验材料

4. 实验方法

5. 数据分析

二、结果

1. 一般资料

2. 益生菌药品检验

3. 测序前质控

4. 16S rDNA测序三联组肠道菌群

5. 16S rDNA测序益生菌组肠道菌群

6. 两种疗法的肠道菌群比较

三、讨 论

1. 临床指标研究评价

2. 肠道菌群多样性探讨

四、结 论

1. 临床部分结论

2. 肠道菌群部分结论

参考文献

文献综述

主要英文缩略词表

学位期间发表文章（第一作者）

致谢