表观遗传沉默NKD2表达激活Wnt信号通路促进乳腺癌增殖

摘要

背景:乳腺癌是全世界女性中最常见的恶性肿瘤，并且死亡率位居第二位。在中国，乳腺癌的发病率较西方国家低。这种差异可能与生活习惯及环境因素有关，袁观遗传改变常常受到环境因素的影响。异常的基因甲基化在乳腺癌中频繁发生，与乳腺癌的发生发展相关。Naked cuticle homolog1(NKD1)和2(NKD2)是果蝇 nakedcuticle基因在哺乳动物的同源基因。 NKD1位于染色体16q12.1， NKD2位于染色体5p15.3。已发现许多肿瘤包括乳腺癌中，这些区域频繁发生杂合性缺失(Loss ofheterozygosity，LOH)。NKD1和NKD2已被报道通过与Dishevelled相互作用负调控经典Wnt信号通路。在人和鼠的骨肉瘤细胞中发现NKD2可以抑制肿瘤的增殖和迁移，且在恶性胶质瘤细胞中NKD2发生启动子区的甲基化改变。
　　目的:研究NKD2在乳腺癌中的表观遗传改变及其在乳腺癌中的作用和作用机制。
　　方法:本研究在6株乳腺癌细胞系和68例乳腺癌组织中，采用甲基化特异PCR，半定量RT-PCR，免疫组织化学分析NKD2在细胞系和组织中的甲基化状态及表达水平的改变。MTT，克隆形成实验和流式细胞术的方法分析NKD2对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。双荧光素酶实验，western blot和siRNA的方法，并结合裸鼠成瘤模型探讨NKD2对乳腺癌的作用及其在Wnt信号通路中的作用机制。
　　结果:NKD2启动子区在MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中呈甲基化状态，且其表达缺失，经5-AZA处理后表达恢复。在MCF7，ZR75-1，BT474和T47D细胞中NKD2呈低表达，启动子区呈半甲基化状态，经5-AZA处理后表达增加。在原发性乳腺癌组织中，NKD2的甲基化率为51.4％(35/68)，其甲基化与NKD2的表达沉默或降低有关(p＜0.05)。体内、外实验发现NKD2可以抑制乳腺癌细胞的增殖。 NKD2诱导G0/1期阻滞并且抑制Wnt信号通路的活性。
　　结语，NKD2在乳腺癌中频繁发生甲基化，NKD2的表达受启动子区甲基化调控。NKD2通过抑制Wnt信号通路而抑制乳腺癌细胞的生长。

目录

声明

缩略词表

摘要

引言

第一部分 NKD1及NKD2基因在乳腺癌细胞系中的表达及甲基化调控

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

五、小结

第二部分 NKD1及NKD2在人乳腺癌组织中的甲基化改变

一、实验材料

二、实验方法

三、结果分析

四、讨论

五、小结

第三部分 NKD2在乳腺癌中的功能研究

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

五、小结

第四部分 NKD2对经典Wnt信号通路的影响

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

五、小结

第五部分 NKD2抑癌作用在体外实验中的研究

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

五、小结

第六部分 结论

参考文献

文献综述 Cdx基因家族在结肠发育以及肿瘤中的作用

攻读学位期间发表论文情况

致谢