大鼠离断肢体灌注保存及回植的实验研究

摘要

目的:减轻离断肢体的因缺血缺氧造成的损害，保护组织活性，延长回植手术时限，增加回植术后肢体的成活率和功能恢复。
　　方法:选取健康成年Wistar大鼠（雌性）90只(体重250-300g)。实验一大鼠离断肢体不同灌注液一次性灌注保存效果的比较研究:选出40只大鼠随机分为4组，每组10只，即形成80只离断肢体模型，第一组为UW液灌注组;第二组为HTK液灌注纽;第三组为生理盐水灌注组;第四组为不灌注纽，作为对照。前三组离断后肢后以12ml/h速度灌注对应灌注液1h。自离断后将肢体放置在4℃的冰箱内保存24h。收集不同时间点的肌肉组织进行匀浆，匀浆液行ALP、ALT、AST、CK、LDH、GLU、LAC、SOD生化检测;同时在离断6h、12h、18h、24h取肌肉组织行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫组化染色。于离断12h、24h取肌肉组织标本，透射电镜检查观察其细胞超微结构的变化。实验二大鼠离断肢体不同灌注液每隔12小时间断灌注后低温保存效果的比较研究:选出30只大鼠随机分为3组，每组10只，即形成60支离断肢体模型，第一组为UW液灌注组;第二纽为HTK液灌注组;第三组生理盐水灌注组。各组于离断后0h、12h以12ml/h速度分别灌注对应灌注液1h。自离断后将肢体放置在在4℃冰箱内保存24h。收集不同时间点的肌肉组织进行匀浆，匀浆液行ALP、ALT、AST、CK、LDH、GLU、LAC、SOD生化检测;同时在离断6h、12h、18h、24h取肌肉组织行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫组化染色，并统计细胞面积比例及免疫组化IOD值;于离断12h、24h取肌肉组织标本，透射电镜检查观察其细胞超微结构的变化。实验三大鼠离断肢体UW液灌注采用不同灌注方法保存效果的对比研究:统计分析实验一UW液一次性灌注组和实验二UW液每隔12h间断灌注组的结果。实验四大鼠离断肢体UW灌注低温保存后回植的比较研究:选出20只大鼠随机分为2组-实验组和对照组，每组10只，各组均行右后肢离断手术，对照组正常结扎腹壁浅动静脉两端并剪断，实验组结扎腹壁浅动静脉远端，并穿刺腹壁浅动脉，从中缓慢灌注UW液至股静脉、创面渗出清亮后，结扎腹壁浅近端。4℃冷藏离断右后肢3h后行回植手术，观察大鼠及其右后肢成活情况，行HE等检测。
　　结果:实验一:随离断时间延长，灌注组的ALP、ALT、AST、CK、LDH、LAC较不灌注组低，灌注组的GLU和SOD较不灌注组高。UW组各生化指标与不灌注组各指标间存在统计学差异，其余组间部分指标存在差异。各时间点，三个灌注组较不灌注纽组织HE染色、透射电镜病理变化轻微，灌注组中UW液组病理变化最轻。细胞面积比例各组间均有统计学差异(P＜0.05)，各时间点不灌注组的细胞面积比例最小，12h前生理盐水组细胞面积比例最大，12h后UW液组细胞面积比例最大。免疫组化IOD:各组无统计学差异。实验二:生化指标间部分存在统计学差异，UW液灌注组的ALP、ALT、AST、LDH、SOD较生理盐水灌注组低。各时间点，UW液灌注组和HTK液灌注组病理变化相似，较生理盐水灌注组病理变化轻。细胞面积比例各组间均有统计学差异(P＜0.05)，各时间点生理盐水组细胞面积比例最大。免疫组化IOD:各组无统计学差异。实验三:UW液一次性灌注组和UW液间断灌注组生化、细胞面积比例、免疫组化IOD无统计学差异，HE、PTAH及透射电镜示病理变化类似。实验四:实验组成活率为60％，对照组仅为30％，且HE染色提示UW液灌注可以减少肌肉组织中缺血再灌注损伤。
　　结论:1、对离断肢体行灌注4℃保存，可以有效的减轻组织因缺血缺氧造成的损害，效果强于直接保存。2、使用UW液、HTK液、生理盐水对大鼠离断肢体进行一次性灌注， UW液的灌注保存效果最好。3、使用不同种灌注液对大鼠离断肢体进行每隔12h间断灌注，UW液的灌注保存效果最好。4、使用UW液对大鼠离断后肢一次性灌注和每隔12h间断灌注，两种灌注方法效果相当。5.使用UW液对大鼠离断后肢一次性灌注后，4℃冷藏保存后回植(缺血时间在3-5h)，较单纯冷藏保存后回植肢体成活率高，术后成活肢体缺血缺氧损伤轻。

目录

声明

中英文缩略词表

摘要

前言

第一部分 大鼠离断肢体不同灌注液一次性灌注后低温保存效果的比较研究

材料与方法

结果

讨论

第一部分 附图

第二部分 大鼠离断肢体不同灌注液每隔12小时间断灌注后低温保存效果的比较研究

材料与方法

结果

讨论

第二部分 附图

第三部分 UW液灌注大鼠离断肢体不同灌注方法保存效果的比较研究

材料与方法

结果

讨论

第四部分 大鼠离断肢体UW灌注4℃保存后回植的比较研究

材料与方法

结果

讨论

附图

创新点

不足之处

结论

参考文献

综述 离断肢体保存的现状及研究进展

攻读学位期间发表文章

致谢