非布索坦对鼠平滑肌细胞增殖与迁移的影响

摘要

血管平滑肌细胞(VSMC)的异常增殖与迁移在动脉粥样硬化发生发展过程中起着十分重要的作用。活性氧（ROS）是刺激血管平滑肌细胞增殖与迁移的一个重要因素。非布索坦(Fx)是一种新型的黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂，它可通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性抑制活性氧的产生。然而，非布索坦在血小板源性生长因子(PDGF)介导的平滑肌细胞增殖与迁移方面的影响尚不清楚。
　　目的:本研究的目的在于观察非布索坦在PDGF介导的血管平滑肌细胞增殖与迁移方面的影响。
　　方法:选取180-200g雄性SD大鼠，分离大鼠胸主动脉，采用组织块贴壁法得到4-5代的血管平滑肌细胞，将上述细胞分别分为以下4组，control组、PDGF组、PDGF+ XO组、PDGF+ XO+ Fx组，而PDGF+ XO+ Fx组又可按Fx浓度不同分别PDGF+XO+Fx(1μM)、PDGF+XO+Fx(5μM)、PDGF+XO+Fx(10μM)组，PDGF+ XO组和PDGF+ XO+ Fx组先给予含相同浓度的XO(5mU/ml)及不同浓度的Fx（1μM、5μM、10μM）的培养基孵育24h，24h后换用含相同浓度PDGF(20ng/nl)的培养基继续孵育24h。采用CCK-8方法观察细胞的增殖情况，采用transwell方法观察细胞的迁移情况，采用流式细胞学方法观察细胞周期的变化情况，采用Western Blot方法观察细胞周期调节蛋白的表达情况及PDGF信号通路的变化。
　　结果:1.在给予PDGF、XO刺激后，PDGF+XO（0.964±0.049）组的增殖能力与control组（0.538±0.074）相比明显增强，P＜0.05;在给予不同浓度非布索坦（1μM、5μM、10μM、20μM）刺激后，其增殖能力逐渐减弱，呈剂量依赖型关系，且PDGF+ XO+ Fx（10μM）组（0.573±0.055）的增殖能力与PDGF+XO（0.964±0.049）组相比减弱最明显，P＜0.05。2.在给予PDGF、XO刺激后，PDGF+XO组（37.6±4.8）迁移细胞数与control组（9.6±2.2）比明显增多，P＜0.05;而给予非布索坦刺激后，PDGF+ XO+ Fx组（14.4±2.1）迁移细胞数与PDGF+XO组（37.6±4.8）相比明显降低，P＜0.05。3.在给予PDGF、XO刺激后，PDGF+ XO组细胞周期S期的比例（19.70±1.21％）较control组（8.49±1.50％）明显升高，P＜0.05;而给予非布索坦刺激后，PDGF+ XO+ Fx组的S期比例（12.10±1.73％）较PDGF+ XO组（19.70±1.21％）明显下降，P＜0.05。4.在给予PDGF、XO刺激后，PDGF+ XO组细胞周期调节蛋白(cyclin D1，CDK4，cyclinE and CDK2)的表达较control组明显升高，而这一现象可被非布索坦所抑制，且呈剂量依赖型关系。5.非布索坦在可明显抑制PDGF介导的pAkt和pERK1/2的升高，且呈剂量依赖型关系。
　　结论:1.非布索坦可抑制PDGF介导的血管平滑肌细胞的增殖与迁移。2.非布索坦对平滑肌细胞增殖的抑制效应可能与细胞周期有关。3.非布索坦可明显抑制PDGF介导的Akt和ERK信号途径的激活。

目录

声明

缩略词表

摘要

前言

1．引言

2．实验材料

3．实验方法

4．实验结果

5．讨论

6．结论

参考文献

文献综述 PDGF与心血管疾病

攻读学位期间发表文章情况

致谢