对比负载MAGE-A3抗原的三种APC细胞递呈的效应细胞对NSCLC细胞特异性体外杀伤的效果差异的研究

摘要

目的：
　　对比经乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen，HBVc)-黑色素瘤抗原-A3（melanoma antigen gene-A3，MAGE-A3）融合蛋白负载的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)、树突状细胞(dendritic cell，DC)、CD8-细胞激活的效应细胞对人非小细胞肺癌细胞的特异性体外杀伤作用。
　　对比分别负载乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBVc)-黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3，MAGE-A3)融合蛋白、黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3，MAGE-A3)多肽、乙肝核心抗原(hepatitisB virus core antigen，HBVc)的抗原提呈细胞（Antigen presenting cell APC）激活的效应细胞对黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3，MAGE-A3)高表达的人非小细胞肺癌细胞的特异性体外杀伤作用。
　　方法：
　　本研究先从健康的人的外周血液中将单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)分离出，使用粒—巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和白介素-2(interleukin-2，IL-2)刺激PBMC，从中诱导出树突状细胞(dendritic cell,DC)、CD8-细胞。将外周血单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)、树突状细胞(dendritic cell,DC)、CD8-细胞分别作为本研究的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)，将抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)分为3组，分别负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白、MAGE-A3多肽、乙肝核心抗原(hepatitisB virus core antigen，HBVc)中的每种抗原，负载后与单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)共培养，诱导出特异性细胞毒性单个核细胞(peripheral blood monocyte cell，PBMC)，以该单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)作为效应细胞，以高表达MAGE-A3抗原的人非小细胞肺癌细胞株H358为靶细胞，低表达MAGE-A3抗原的细胞系293T作为对照，进行肿瘤细胞杀伤试验。
　　结果：
　　1.负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白抗原的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、树突状细胞(dendritic cell，DC)、CD8-细胞作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)能够成功诱导出特异性的效应细胞，并且对非小细胞肺癌细胞有显著的杀伤作用，外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell APC)其杀伤率显著性高于树突状细胞(dendritic cell，DC)作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)、CD8-细胞作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell，APC)的对照组(P＜0.05)。
　　2.在负载乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen，HBVe)-黑色素瘤抗原-A3（melanoma antigen gene-A3，MAGE-A3）融合蛋白、黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3，MAGE-A3)多肽、乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen，HBVc)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)激活的效应细胞，在效靶细胞比为20∶1时，对黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3，MAGE-A3)高表达的人非小细胞肺癌H358细胞的特异性体外杀伤作用显著优于黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3，MAGE-A3)低表达的293T细胞对照组。负载乙肝核心抗原(hepatitisB virus core antigen，HBVc)-黑色素瘤抗原-A3（melanoma antigen gene-A3，MAGE-A3）融合蛋白的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)激活的效应细胞对黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3，MAGE-A3)高表达的人非小细胞肺癌H358细胞的特异性体外杀伤作用显著优于黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3，MAGE-A3)多肽组及乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBVc)(P＜0.05)。
　　结论：
　　1.外周血单个核细胞、树突状细胞、CD8-细胞均能作为抗原提呈细胞，能够成功诱导出特异性的效应细胞，并显著的特异性杀伤非小细胞肺癌细胞。外周血单个核细胞作为抗原提呈细胞比树突状细胞、CD8-细胞更具优势。
　　2.HBVc-MAGE-A3融合蛋白的结构让它能够更好的暴露出抗原，结合抗原提呈细胞的亲和力更强。比MAGE-A3多肽、乙肝核心抗原作为负载抗原提呈细胞的抗原更有优势。
　　3、MAGE-A3作为肿瘤特异性抗原，负载到抗原提呈细胞能特异性的杀伤MAGE-A3高表达的非小细胞肺癌细胞。

目录

声明

中英文缩略词表

摘要

前言

参考文献

第一部分 抗原的制备

实验材料

实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 用Western Blot方法检测MAGE-A3抗原在靶细胞中的表达

实验材料

实验方法

实验结果

第三部分 三种负载MAGE-A3抗原的APC细胞提呈的效应细胞对靶细胞的杀伤实验

实验材料

实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 MAGE-A3在非小细胞肺癌中的研究进展

个人简介及攻读学位期间论文发表情况

致谢