不同方式抗原负载的树突状细胞介导的细胞毒性T细胞体外肿瘤杀伤效应

摘要

免疫治疗是继手术治疗、放疗、化疗之后肿瘤治疗的新方法,其技术、方法日趋成熟,治疗过程的安全性逐步提高.但是如何进一步提高治疗效率、降低复发率及各种并发症,提高患者生存质量已成为肿瘤免疫治疗领域的一项重要研究内容.树突状细胞(DC)是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞(APC),它具有强大的T细胞激活能力,并能活化初始型T细胞.它不仅能够激活自体的抗肿瘤免疫,同样能够提高异体的抗肿瘤效应,基于此,DC的抗肿瘤免疫治疗已在临床上开始应用,显示出广泛的前景.因为大部分病人和复发者的肿瘤组织和细胞的获取较为困难,目前的方法难以广泛有效地开展DC的免疫治疗.而RNA可以在体外进行扩增,再利用脂质体转染DC能较好地解决该问题,但是否会影响DC的诱导分化和功能,和其他方法相比,肿瘤杀伤效应如何,需要进一步探讨.该文实验第一部分我们采用了外周血干细胞作为前体细胞,联合应用IL-4,GM-CSF和TNF-α诱导DC分化成熟,采取肿瘤细胞冻融抗原和脂质体转染肿瘤细胞总RNA两种方式负载DC,继续培养至2周,光镜和扫描电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测DC表面标志,以此来鉴定培养的DC.第二部分实验中,我们用尼龙毛柱法分离健康人外周血T细胞,与不同方式负载抗原的DC共培养后诱导产生特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),流式细胞仪检测CTL的CD3、CD4和CD8的阳性率,用乳酸脱氢酶(LDH)方法体外测定CTL杀伤肿瘤细胞的效率,比较冻融肿瘤抗原负载DC和转染肿瘤细胞总RNA的DC所诱导出的CTL杀伤肿瘤的差异.通过该研究,得出的结论:脂质体转染肿瘤细胞总RNA给DC不影响DC的分化成熟和功能,而且该方法介导的CTL杀伤肿瘤效应比肿瘤冻融抗原负载DC介导的CTL杀伤肿瘤效应强,另外,转染所需的肿瘤细胞数量少.

目录

英文缩略词

Abstract

前言

第一部分不同方式抗原负载DC的体外培养及鉴定

实验材料

实验方法

实验结果

论论

第二部分DC介导的CTL体外肿瘤杀伤效应

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述