岩藻黄素通过抑制β-连环蛋白抑制U87和U251细胞的迁移和侵袭

摘要

背景:胶质母细胞瘤(GBM)来源于人类中枢神经系统上皮组织，且是最常见的原发性肿瘤[1]。手术加上术后联合放疗化疗是现行GBM治疗的标准方案[2，3]。据统计胶质母细胞瘤患者在现今治疗技术下平均存活时间是15个月[4]。在Wnt信号通路中β-catenin关键分子之一，它与包括GBM在内的多种肿瘤都有密切关系[5，6，7]。据之前研究，在胶质瘤侵袭和迁移过程中β-catenin及其下游信号（如COX-2，MMP-2/9）都发挥着关键的作用，从而导致胶质瘤患者常常术后复发，放化疗抵抗，预后差，生存期短[8，9，10]。Fucoxanthin（岩藻黄素）是一种海洋植物的提取物，属于类胡萝卜素族，其分子结构中特异的共轭羰基，乙酰基官能团使其具有抗氧化活性，现有研究发现Fucoxanthin对直肠癌、结肠癌的发生发展产生抑制作用[11,12，13]。在先前的研究中，我们发现岩藻黄素可以通过多种机制来抑制各种癌细胞，促癌细胞凋亡、癌细胞的细胞周期停滞[14,15，16]，然而，岩藻黄素是否可以抑制胶质瘤侵袭迁移仍是未知。在目前的研究中，我们发现了岩藻黄素在体外试验中具有抗肿瘤活性。此外，我们侧重于岩藻黄素对癌细胞抗侵袭和抗迁移的影响，并研究了其分子机制。
　　目的:
　　1.研究岩藻黄素对胶质瘤干细胞增殖的抑制;
　　2.研究岩藻黄素对胶质瘤干细胞迁徙和侵袭的抑制;
　　3.研究岩藻黄素在胶质瘤干细胞迁徙和侵袭过程涉及的分子机制;
　　方法:
　　1.MTT法探究岩藻黄素对胶质瘤干细胞增殖的抑制作用;
　　2.划痕实验测定岩藻黄素作用后细胞迁移能力的变化
　　3.Transwell板上检测岩藻黄素作用后U87及U251细胞侵袭迁移能力
　　4.Western blotting检测岩藻黄素作用后U87及U251侵袭迁移相关蛋白变化
　　5.用质粒转染的方法制造β-catenin过表达的U87及U251细胞
　　6.检测岩藻黄素作用后U87及U251细胞系中金属基质蛋白酶含量
　　7.过表达β-catenin后岩藻黄素对于细胞侵袭迁移相关蛋白作用的进一步论证。
　　8.图像及数据处理所得图像使用Image J处理，处理后所有数据均以平均值±标准误(X±SE)表示，应用SPSS18.0进行处理，成组数据采用t检验，以P＜0.05具有统计学意义。
　　结果:
　　1两个细胞系分别培养于浓度范围从25μ到100μm的岩藻黄素中，后分别于12、24小时后观察细胞活性下降程度。与对照细胞相比，U87细胞存活率分别为是86.82％、71.12％、37.36％。同时， U251细胞的细胞存活值分别为71.68％、55.76％、38.1％。结果表明，岩藻黄素对U87和U25细胞的增殖有较强的抑制作用。
　　2.Fucoxanthin对胶质瘤干细胞U87及U251的侵袭迁移能力有明显的抑制作用
　　3.Fucoxanthin对胶质瘤干细胞U87及U251的侵袭迁移能力是经由Wnt/β-catenint通路作用达到效果的。
　　3.1 岩藻黄素抑制β-连环蛋白/cox2/MMP2/9通路
　　3.2 β-连环蛋白的过度表达会减弱岩藻黄素作用。Β-连环蛋白的过度表达逆转岩藻黄素的抗转移活性
　　结论:我们认为在体外，岩藻黄素可以有抑制胶质瘤干细胞侵袭能力，从而抑制GBM转移。此外，我们证明了岩藻黄素可以通过β-连环蛋白，部分诱导抑制调节MMP2/9和COX2从而抑制细胞侵袭迁移。我们由此得出结论，岩藻黄素是一种有望治愈胶质瘤的化学制剂。

目录

声明

英文缩写表

摘要

前言

第一部分 Fucoxanthin抑制U87和U251细胞侵袭迁移能力的体外实验

1．材料

2 试验方法

结果

讨论

第二部分 Fucoxanthin抑制U87及U251细胞侵袭迁移能力的机制探究

材料和方法

1．材料

2．试验方法

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述

攻读硕士期间发表文章情况

致谢