嗜线虫致病杆菌CB6菌株杀虫蛋白的活性及其分离纯化

摘要

昆虫病原线虫共生菌是寄生于昆虫病原线虫肠道内的一类细菌,与线虫互惠共生.该类细菌分致病杆菌属(Xenorhabdus)和光杆状菌属(Photorhabdus)两个属,属下共有6个种.共生菌对昆虫具有极强的致病力,大部分菌株具有血腔活性,LD<,50>仅为1—10个活细胞.国内外科研工作者已分离到了具有杀虫活性的脂多糖、蛋白质等化合物,并发现共生菌杀虫蛋白杀虫谱宽、杀虫活性强,是极具应用潜力的生物杀虫剂.昆虫病原线虫共生菌杀虫蛋白已成为国内外研究的热点. 该研究选取了11个菌株为实验材料,通过对菌悬液的生物测定,筛选得到了一株高毒力的菌株,为采自北京郊区的嗜线虫致病杆菌(X.nematophila)CB6菌株.论文确定了该菌株具有杀虫活性的物质为蛋白质,测定了其生物活性,最后分离纯化得到杀虫蛋白纯品.

目录

文献综述

1昆虫病原线虫共生菌的分类

2昆虫病原线虫共生菌的型态变异

3昆虫病原线虫共生菌的生物活性代谢物质

3.1抑菌物质

3.2杀虫物质

3.3抗肿瘤物质

4共生菌杀虫物质的致病机理

4.1共生菌的抗免疫反应

4.2杀虫蛋白对昆虫肠道的破坏

5共生菌的安全性

引言

材料与方法

1试验材料

1.1供试菌株

1.2供试昆虫

1.3主要化学试剂

1.4主要试验仪器

1.5培养基

1.6常用储备液及缓冲液

2试验方法

2.1高毒力菌株的筛选

2.2 CB6菌株杀虫物质的初步确定

2.3 CB6菌株杀虫粗蛋白对棉铃虫幼虫的生物活性

2.4 CB6菌株杀虫蛋白的分离纯化

2.5共生菌杀虫蛋白的部分性质

结果与分析

1高毒力菌株的筛选

2 CB6菌株杀虫物质的初步确定

2.1共生菌发酵液上清液的活性

2.2共生菌菌体细胞的活性

2.3共生菌胞内成分的活性

3 CB6菌株杀虫粗蛋白对棉铃虫幼虫的生物活性

3.1杀虫粗蛋白对棉铃虫幼虫生长发育的影响

3.2杀虫粗蛋白对棉铃虫幼虫取食的影响

4杀虫蛋白的分离纯化

4.1(NH4)2SO4分段盐析

4.2离子交换层析

4.3凝胶过滤层析

4.4聚丙烯酰胺凝胶电泳检测

5杀虫蛋白部分性质的测定

5.1杀虫蛋白的热稳定性

5.2杀虫蛋白对酸碱的稳定性

5.3杀虫蛋白对蛋白酶的稳定性

5.4杀虫蛋白的紫外吸收光谱

讨论

1昆虫病原线虫共生菌的培养方法

2昆虫病原线虫共生菌具有杀虫活性的代谢物

3昆虫病原线虫共生菌杀虫效果的评价方法

4蛋白质分离纯化及纯度鉴定方法

结论

参考文献

论文缩略词表

致谢