参附注射液对冠心病心力衰竭心肾阳虚证调节性T细胞及细胞因子的影响

摘要

目的:运用流式细胞技术(Flow cytometry，FCM)及酶联免疫吸附实验法(ELISA)，准确测定冠心病心力衰竭心肾阳虚证患者外周血调节性T细胞（CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞）及细胞因子白介素10（IL-10）、转化生长因子β1(TGF-β1)的水平，并进一步研究参附注射液对冠心病心力衰竭心肾阳虚证患者调节性T细胞及相关细胞因子的影响，阐明参附注射液通过调控调节性T细胞及相关细胞因子改善心力衰竭的症状，为临床应用益气温阳中药提供实验依据，并从调节性T细胞水平，探讨冠心病慢性心力衰竭的免疫炎症机制，为临床治疗冠心病慢性心力衰竭提供新的思路。
　　方法:收集2013年8月至2014年2月间，对中国中医科学院广安门医院心内科诊断为冠心病的住院患者进行评估，将符合慢性心力衰竭诊断的患者进行纽约心功能(NYHA)评估后纳入冠心病慢性心力衰竭组;将非慢性心力衰竭患者纳入冠心病非慢性心力衰竭组。其中心功能为Ⅲ级、Ⅳ级患者根据心肾阳虚证辨证依据分为心肾阳虚证心力衰竭（XSYX组）、非心肾阳虚证心力衰竭(FXSYX组)。对心肾阳虚证心力衰竭患者随机给予参附注射液治疗或常规西药治疗，治疗大约10±2天。所有入组患者清晨收集EDTA抗凝及肝素抗凝血浆样本，其中肝素抗凝血浆样本运用流式细胞技术测定调节性T细胞（CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞）的比例;EDTA抗凝血浆样本采用酶联免疫吸附实验方法测定IL-10及TGF-β1水平，并采用化学发光免疫技术测定NT-proBNP水平。同时采集所有入组患者相关各项检查和实验室检验结果数据。所得数据应用统计学软件进行分析处理。
　　结果:本研究共纳入冠心病慢性心力衰竭患者93例(NYHAⅡ级25例，NYHAⅢ级35例，NYHAⅣ级33例)，冠心病非心力衰竭患者32例(NYHAⅠ级)。对冠心病慢性心力哀竭心功能Ⅲ、Ⅳ级患者进行中医辨证，其中心肾阳虚证56例，非心肾阳虚证12例。经统计学分析，冠心病慢性心力衰竭组与冠心病非慢性心力衰竭组，两组患者在年龄、性别比例等方面差异无统计学意义。XSYX与FXSYX两组患者在年龄、性别比例等方面差异无统计学意义。
　　1.冠心病慢性心力衰竭患者血浆NT-proBNP及IL-10较冠心病非心力衰竭组明显升高，而LVEF、FS、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及血浆TGF-β1水平较冠心病非心力衰竭组明显下降，其差异有统计学意义(P＜0.05);
　　2.冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者NT-proBNP、LVEDD较冠心病慢性心力衰竭非心肾阳虚证患者升高，而LVEF、FS、CD4+比例及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例较冠心病慢性心力衰竭非心肾阳虚证患者降低，其差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　3.参附注射液对冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者心功能疗效:对照组显效6例(20.00％)，有效15例(50.00％)，无效8例(26.67％)，加重1例(3.33％)。治疗组显效7例(26.92％)，有效17例(65.38％)，无效2例(7.69％)，加重0例(0％)。对照组总有效率70.00％与治疗组总有效率92.31％比较，两组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　4.参附注射液对冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者心肾阳虚证证候疗效分析:对照组显效4例(13.33％)，有效15例(50.00％)，无效9例(30.00％)，加重2例(6.67％)。治疗组显效9例(34.62％)，有效16例(61.54％)，无效1例(3.85％)，加重0例(0％)。对照组总有效率63.33％与治疗组总有效率96.15％比较，两组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　5.参附注射液对冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例、NT-proBNP及血浆IL-10、TGF-β1的影响:与治疗前相比，对照组与治疗组在治疗后血浆NT-proBNP及IL-10水平下调，具有统计学差异(P＜0.05)，而外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及血浆TGF-β1上调，具有统计学差异(P＜0.05)。同时，治疗组在治疗后血浆NT-proBNP及IL-10水平下调程度较对照组更为明显，具有显著的统计学差异(P＜0.05)，而外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及血浆TGF-β1上调程度也较对照组明显，具有显著统计学差异(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.冠心病慢性心力衰竭患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例下降，表明冠心病慢性心力哀竭患者存在免疫激活状态。
　　2.冠心病慢性心力衰竭患者血浆TGF-β1水平低于冠心病非心力衰竭患者，血浆TGF-β1水平随NYHA心功能分级增加而降低。
　　3.冠心病慢性心力衰竭患者血浆IL-10水平高于冠心病非心力衰竭患者，血浆IL-10水平随NYHA心功能分级增加而升高。
　　4.冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者外周血CD4+细胞比例、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例均低于非心肾阳虚证患者，表明冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者较非心肾阳虚证存在较强的免疫激活状态。
　　5.参附注射液具有改善冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者心功能及改善心肾阳虚证证候的作用，表明其是治疗冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证的有效药物之一。
　　6.参附注射液治疗慢性心力衰竭心肾阳虚证的免疫学机制可能是上调冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例及血浆TGF-β1水平，降低外周血NT-proBNP及血浆IL-10的水平，减轻免疫炎症反应，从而改善冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者的心功能及中医证候达到治疗的作用。

目录

声明

摘要

缩略语表

第一部分 文献综述

综述一 慢性心力衰竭的免疫炎症机制

综述二 参附注射液治疗心力衰竭机理的研究进展

前言

第二部分 实验研究

实验一 冠心病慢性心力衰竭患者调节性T细胞比例及血浆IL-10、TGF-β1水平的研究

材料与方法

结果

实验二 冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者调节性T细胞比例及血浆IL-10、TGF-β1水平的研究

材料与方法

结果

实验三 参附注射液对冠心病慢性心力衰竭心肾阳虚证患者调节性T细胞比例及血浆IL-10、TGF-β1水平的影响

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

个人简历