血府逐瘀汤大鼠含药血清主要成分的初步研究

摘要

研究背景：
　　 血府逐瘀汤(Xuefu Zhuyu Decoction，XFZYD)是临床上常用的活血化瘀经典方，有活血化瘀、行气止痛之功效。该方在传统中医学主要用于胸中血瘀之证，治疗气滞血瘀所致的胸痛、头痛、内热烦闷、失眠多梦、心悸怔忡、急躁易怒等病症，现代医学中常用于治疗冠心病心绞痛、血管及外伤性头痛等多种疾病。在中医理论的指导下，该方不仅可以治疗血瘀引起的出血性疾病，还可以用于闭经等血行不畅之病症，应用非常广泛。最近研究显示，同为血府逐瘀汤含药血清（Xuefu Zhuyu Decoction-Contained Serum，XFZYD-CS）的作用机理研究，有人发现该方作用机制可能与XFZYD促进血管新生相关，也另有研究者表明XFZYD可能与抑制血管新生有关。XFZYD的作用机理引起人们广泛关注，其是否具有双向调节作用，还是其他因素导致，值得进一步深入研究。
　　 研究目的:
　　 为了进一步研究血府逐瘀汤的功效，对该方的物质作用基础有更深入的了解，本研究采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)、液相色谱-质谱-质谱联用（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry/Mass Spectrometry，LC-MS/MS）等分析技术对血府逐瘀汤大鼠含药血清、空白血清的成分进行了初步研究，通过定性、定量分析，初步筛选了XFZYD-CS的主要成分——芍药苷，以期逐步明确XFZYD-CS中的主要药物成分并定量分析。
　　 研究方法:
　　 SD大鼠经血府逐瘀制剂灌胃、取血、分离血清，血清样品用乙腈沉淀蛋白法样品前处理后，用LC-MS/MS法测定含药血清中的芍药苷浓度。色谱柱为Atlantis(R)T3(2.1×100mm3μm)，柱温:40℃，流速:0.3mL/min，进样量:2μL，流动相:A:0.05％甲酸水溶液;B:甲醇，梯度洗脱。离子源:电喷雾(ESI)电离源，源温:325℃，检测模式:负离子检测，干燥气流量(Gas Flow):11 L/min，雾化器压力(Nebulizer):45 psi，采集条件:芍药苷479→120.9，裂解电压:150V，碰撞电压:25V。
　　 研究结果:
　　 1、芍药苷检测浓度在9.14-230.0 ng/mL内线性关系良好，回归方程为Y=1.1666X-7.2314(r=0.9983)。最低定量限为9.14 ng/mL。
　　 2、血府逐瘀胶囊含药血清中芍药苷的浓度:高剂量组含药血清芍药苷的平均值为55.97ng/mL，SD为13.77％，RSD为24.6％。低剂量组平均值为8.38ng/mL，SD为1.84％，RSD为21.9％。中剂量组平均值为23.77 ng/mL，SD为5.58％，RSD23.5％。
　　 3、经统计学分析，血府逐瘀汤含药血清低、中、高三个剂量组中芍药苷的浓度有显著差异。
　　 结论:
　　 本研究以HPLC、LC-MS/MS等检测技术对血府逐瘀汤含药血清、空白血清进行了初步分析研究，确立了大鼠血清中芍药苷的LC-MS/MS检测方法，对血府逐瘀制剂含药血清中所含芍药苷进行了定量分析。本研究建立的大鼠血清中LC-MS/MS测定法，操作简便，灵敏度高，结果准确，样品稳定性良好。
　　 经统计学分析，血府逐瘀汤含药血清低、中、高三个剂量组中芍药苷的浓度有显著差异。其含药血清中芍药苷浓度的差异，是否构成血府逐瘀汤不同药物作用的基础，还需进一步研究验证。

目录

声明

摘要

英文缩略语表

第一部分 文献综述

一 血府逐瘀汤的临床应用及作用机理研究进展

参考文献

二 血样中芍药苷检测方法的研究进展

参考文献

第二部分 实验研究

前言

第一章 动物实验部分

1 实验材料与试药配制

2 实验步骤

第二章 血府逐瘀汤含药血清中芍药苷的HPLC-MS／MS测定

1 实验材料与试药配制

2 样品前处理方法

3．大鼠血清中芍药苷的HPLC-MS／MS分析条件

4．大鼠血清中芍药苷的分析方法的研究与方法确认

5 血府逐瘀汤含药血清中芍药苷的测定结果

第三章 讨论与总结

1 HPLC检测血府逐瘀汤含药血清中芍药苷的情况

2 HPLC-MS／MS检测方法的摸索

3 柚皮苷、苦杏仁苷的HPLC-MS／MS检测情况及分析

3．有关动物实验的讨论

4 数据分析与统计

5 总结

致谢

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