脾藏神理论探讨——脾虚模型脑内神经肽受体基因表达的实验研究

摘要

目的：从五脏藏神理论出发，通过实验研究，以期揭示脾虚对大鼠学习记忆影响的机制，探讨脾胃与神志之间的密切联系，深化脾胃与神志的理论和实验研究，为中医临床从脾胃论治神志疾病提供实验依据。 方法：在理论方面：五脏藏神是中医藏象理论的重要组成部分，这一理论认为人的神志活动可分为神、魂、魄、意、志五种基本的类别，而由五脏分别所主。在五脏皆藏神的基础上，中医理论认为脾胃转枢气机的整体协调是神志活动正常的关键。其二，脾胃是“后天之本”，气血化生之源，灌溉滋养周身，提供了神志活动的物质基础。其三，脾胃运化水湿。同时探讨了脾藏意主思，“意”和“思”的含义，从而提供了脾与神志活动关系密切的理论基础。 在实验方面：以Wistar大鼠为研究对象，分为正常组、模型组、治疗组(造模加灌胃归脾汤)、A方对照组(造模加灌胃柴胡疏肝散)、B方对照组(造模加灌胃天王补心丹)。采用苦降泻下、饮食失节、劳倦过度相结合的方法，复制脾虚动物模型。观察大鼠的体重、进食量、外观表现和动态变化等对模型进行筛选。采用免疫组化方法检测即早基因C-JUN的表达变化，原位杂交方法检测即早基因C-FOSmRNA、神经肽受体SSRmRNA、OTRmRNA的表达变化。并进行HE常规染色检测。 结果：1脾虚模型复制结果采用苦降泻下、饮食失节、劳倦过度相结合的方法，复制脾虚大鼠模型，从第三天开始出现类似脾虚的症状：大便溏泻，消瘦，扎堆，精神萎靡等。第八天症状最重，除正常组外，余四组均80％以上的大鼠出现食少，稀便或粘液便，肛周毛色污秽，懒动，扎堆，眯眼，乏力，耳尖色淡，畏寒，尾凉，体重不增或增加缓慢甚或降低，背毛松散，毛色不荣或掉毛发枯表现。 2HE染色结果正常组大鼠海马CA1区、下丘脑腹侧核、前额叶皮层部位神经细胞形态规则，无异常变化，细胞核呈均匀淡蓝色或蓝色，细胞线清晰，胞核、胞质清晰：模型组大鼠海马CA1区细胞排列紊乱、松散，细胞脱失明显，甚至仅见少量残存的不规则细胞，细胞周围出现间隙，核固缩，染色质深染，或细胞核仅呈很淡的蓝色甚至蓝色消失；在下丘脑腹侧核、前额叶皮层部位大部分出现核固缩，染色质深染，细胞体缩小，呈椭圆形、梭形、三角形和不规则形等多种形态，核仁看不清的现象；治疗组大鼠神经细胞介于正常组模型组之间，神经细胞核固缩现象明显减轻，形态较正常，形态、数量及分布更接近于正常组；A方对照组与B方对照组大鼠神经细胞均有明显的核固缩，染色质深染现象，形态、数量及分布接近于模型组。 3C-JUN免疫组化检测结果大鼠海马CA1区、下丘脑腹侧核、前额叶皮层C-JUN免疫阳性细胞的表达：模型组c-jun免疫阳性反应物的MOD值明显升高，与正常组比较，差异极显著(P＜0.01)；治疗组c-jun免疫阳性反应物的MOD值明显降低，与模型组比较，差异极显著(P＜0.01)；A方对照组和B方对照组c-jun免疫阳性反应物的MOD值与模型组相似，与模型组比较均无显著差异。 4C-FOSmRNA原位杂交检测结果大鼠海马CA1区、下丘脑腹侧核、前额叶皮层C-FOSmRNA的表达：模型组c-fosmRNA阳性反应物的MOD值明显升高，与正常组比较，差异极显著(P＜0.01)；治疗组c-fosmRNA阳性反应物的MOD值明显降低，与模型组比较，差异极显著(P＜0.01)；A方对照组和B方对照组c-fosmRNA阳性反应物的MOD值与模型组相似，与模型组比较均无显著差异。 5SSRmRNA原位杂交检测结果大鼠海马CA1区、下丘脑腹侧核、前额叶皮层SSRmRNA的表达：模型组SSRmRNA阳性反应物的MOD值明显降低，与正常组比较，差异极显著(P＜0.01)；治疗组在海马CA1区，SSRmRNA阳性反应物的MOD值有一定程度的升高，与模型组比较，差异显著(P＜0.05)，在下丘脑腹侧核、前额叶皮层，SSRmRNA阳性反应物的MOD值明显升高，与模型组比较，差异极显著(P＜0.01)；A方对照组SSRmRNA阳性反应物的MOD值与模型组相似，与模型组比较无显著差异；B方对照组在下丘脑腹侧核SSRmRNA阳性反应物的MOD值明显升高，与模型组比较，差异极显著(P＜0.01)，而与正常组比较，无显著差异，在海马CA1区、前额叶皮层，SSRmRNA阳性反应物的MOD值与模型组相似，其统计数据与模型组无显著差异。 6OTRmRNA原位杂交检测结果大鼠海马CA1区、下丘脑腹侧核、前额叶皮层OTRmRNA的表达：模型组OTRmRNA阳性反应物的MOD值明显升高，与正常组比较，差异极显著(P＜0.01)；治疗组OTRmRNA阳性反应物的MOD值明显降低，与模型组比较，差异极显著(P＜0.01)；A方对照组和B方对照组OTRmRNA阳性反应物的MOD值与模型组相似，与模型组比较均无显著差异。 结论：1采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度的方法复制脾虚模型，模型复制成功。 2脾虚模型大鼠HE染色可见到变性的神经元，个别脑区出现神经细胞凝固性坏死。结果说明脾虚引起动物脑部部分损伤，造成学习记忆功能障碍。归脾汤治疗组大鼠HE染色未见到变性的神经元，神经细胞形态及分布与正常组相似，结果说明归脾汤对脾虚大鼠学习记忆能力有明显的改善作用。 3脾虚大鼠脑内c-jun、c-fosmRNA、OTRmRNA表达的升高，SSRmRNA表达的降低，治疗组大鼠脑内c-jun、c-fosmRNA、OTRmRNA表达的降低，SSRmRNA表达的升高，提示脾虚对大鼠学习记忆能力有一定的影响，归脾汤对脾虚大鼠学习记忆能力有明显的改善作用。 4脾胃纳化水谷，转枢气机、运化水湿，脾胃与神志活动密切相关。本实验通过揭示归脾汤治疗脾虚状况可改善大鼠学习记忆能力的机制，为脾主神志提供了客观实验依据。

目录

英文缩略词

前言

综述一脾虚证实验研究概况

综述二即早基因C-FOS、C-JUN的研究进展

综述三生长抑素受体的研究进展

综述四催产素受体的研究进展

第一部分理论研究

第二部分实验研究

实验一脾虚大鼠模型复制

实验二HE染色

实验三脾虚大鼠脑内即早基因C-JUN、C-FOS的表达变化

实验四脾虚大鼠脑内SSR mRNA的表达变化

实验五脾虚大鼠脑内OTR mRNA的表达变化

结论

致谢

个人简历

照片