Ⅰ.中国红豆杉紫杉烯5α-乙酰基转移酶的基因克隆;Ⅱ.银杏内酯环化酶的基因研究

摘要

紫杉醇是一种具有三环二萜紫杉烷母核结构的复杂化合物.柴杉醇的生物合成至少包括12种不同的酶促反应.根据已知的太平洋红豆杉紫杉烯5α-乙酰基转移酶的基因序列,合成了该基因的5'端引物和3'引物.以该引物扩增中国红豆杉cDNA文库,得到了1.3kb的片段,将其连接到pMD18-T载体上,测定其序列.序列分析显示,该基因与太平洋红豆杉紫杉烯5α-乙酰基转移酶基因有98﹪的同源性,应为中国红豆杉紫杉烯5α-乙酰基转移酶基因.该基因长1317个核苷酸,推断为439个氨基酸.银杏内酯是银杏叶中主要的活性成分之一,是一类特异有效的血小板活化因子(platelet-activatingfactor)拮抗剂.该文探讨了利用银杏同源探针和线豆杉紫杉烯环化酶异源探针筛选银杏内酯环化酶的过程.另外我们用合成的引物与银杏cDNA文库臂上的引物配对,以期得到环化酶基因或基因片段.

目录

第一部分：中国红豆杉紫杉烯5a-乙酰基转移酶的基因克隆

前言

材料和方法

1、实验材料

2、实验方法

结果与讨论

1、基因克隆结果

2、序列分析结果

3、讨论

4、展望

结论

第二部分：银杏内酯环化酶的基因研究

一、前言

二、实验设计

三、材料和方法

1.实验材料

2.实验方法

四、结果与讨论

Ⅰ、引物设计与探针的准备及序列分析

Ⅱ、银杏cDNA文库的筛选

Ⅲ、讨论

结论

文献综述

附录一分子生物学实验操作方法

附录二：DNA测序图谱和序列

致谢