化学性缺血导致血管内皮细胞凋亡的机制探讨及葛根素保护作用的观察

摘要

Caspase家族在细胞凋亡中发挥着非常重要的作用,该实验通过观察四种Caspase抑制剂对化学性缺血造成体外培养的牛主动脉内皮细胞损伤的影响,希望能进一步明确缺血性内皮细胞凋亡的分子机制,为研制血管保护性药物提供理论线索.研究了葛根素对缺血性内皮细胞损伤的保护作用.该实验观察了其对缺血缺氧状态下内皮细胞凋亡的作用,希望进一步明确其治疗作用的机制,并为治疗新的适应症提供理论参考.该实验以氰化钠合并无糖培养基造成化学性缺血缺氧模型,在此基础上,进行台盼兰染色观察细胞的受损死亡情况;采用DNA琼脂糖凝胶电泳、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测凋亡细胞DNA的断裂;采用流式细胞仪分析技术监测特异性凋亡峰;进行Hoechst33342染色观察凋亡细胞染色质凝聚现象,并通过免疫细胞化学染色方法观察受损内皮细胞Caspase-3的表达.结果提示,Caspase抑制剂至少通过减少细胞DNA断裂和染色体凝聚而减轻化学性缺血对内皮细胞的损伤,在缺血性内皮细胞凋亡的发生机制中至少存在Caspase-1、Caspase-3、Caspase-6的参与,在Caspase的蛋白酶级联切割反应中Caspase-1、6位于Caspase-3的上游.葛根素可减少缺血性内皮细胞凋亡的发生,对Caspase-3的表达也有明显的抑制作用.

目录

缩略词表

前言

材料与仪器

实验方法

实验结果

一. 化学性缺血导致牛主动脉内皮细胞凋亡模型的建立

二. Caspase抑制剂对化学性缺血所致牛主动脉内皮细胞损伤的保护作用

三. 葛根素对化学性缺血所致牛主动脉内皮细胞凋亡的保护作用

讨论

总结

参考文献

文献综述

致谢