NFA1、NFA2胞内区相互作用蛋白初步研究

摘要

为进一步研究这两个新基因蛋白1、2(NFA1,2)的功能,确定其在神经细胞内的相互作用蛋白,推测其可能的下游路径,了解春在神经系统中的作用,研究人员克隆并表达了4.1家族和MAGUK家族几种蛋白中与膜蛋白相互作用的结构域,验证了它们与NFA1,NFA2胞内区的相互作用.为验证NFA1,NFA2与细胞骨架蛋白蛋白4.1家族和MAGUK家族间相互作用,研究人员分别对编码蛋白4.1N、B、G、R的膜结合结构域和hdlg的PDZ1-2、PDZ1-3结构域cDNA进行PCR扩增,并克隆到原核细胞表达载体pGEX-4T1中,转化大肠杆菌获得了表达纯化的GST-4.1B融合蛋白、GST纯化蛋白、GST-NFA1胞内区融合蛋白、GST-NFA2胞内区蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔,成功制备了上述蛋白的高效价多克隆抗体.应用生物传感技术,研究人员初步确定蛋白4.1家族的膜结合结构域与NFA1、NFA2胞内区存在相互作用.为了深入研究NFA1蛋白在神经系统中的作用,了解其相互作用分子,研究人员应用IAsys系统检测到小鼠脑细胞提取液中,存在与NFA1蛋白相结合的组分.进一步采用GSTpulldown的方法,将原核细胞表达的GST-NFA1蛋白与分离的小鼠脑细胞提取液共同孵育,寻找与NFA1蛋白相互作用的分子,结果发现小鼠脑细胞中存在两个与NFA1胞内区结合的蛋白.其鉴定工作正在进行中.

目录

前 言

实验材料

实验方法

结果

讨 论

小 结

参考文献

综述

附 录

致 谢