人心肌肌钙蛋白I（cTnI）胶体金免疫层析分析法的研究

摘要

目前在工业化国家，心血管疾病是威胁人类生命的主要疾病之一，发病率和死亡率均很高，对此类疾病进行早期诊断和治疗具有重大意义。心由于人心肌组织难以获得，因此从组织中大量提取纯化cTnI，把它作为研究或者诊断用的抗原是极其困难的，所以本实验采用Fmoc保护的氨基酸，用固相法人工合成多肽cTnI抗原，其特点是选择合成天然cTnI蛋白上的一段氨基酸多肽，具有免疫原性、且水溶性好，经高效液相层析纯化和质谱分析证实所合成多肽达到后续实验的要求。同时为了加强这段多肽的免疫原性，把它和血蓝蛋白(KLH)载体偶联，用该连接物免疫家兔，采用经典的多克隆抗体制备技术制备cTnI合成多肽抗体，采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)对cTnI抗体进行检测，达到实验要求。采用柠檬酸三钠还原法制备金溶胶。用制备的抗体标记纳米级的胶体金颗粒和包被微孔硝酸纤维素膜，并结合层析技术建立了cTnI的胶体金免疫层析分析法，获得了满意的结果。该方法具有较高的灵敏度和特异性。为急性心肌梗死(AMI)高危人群的普查和医院辅助诊断AMI提供特异、灵敏、简便、快速的诊断技术，为制备国产化cTnI试剂盒奠定了基础。

目录

摘要

前言

材料与方法

一、实验材料

三、实验方法

结果

1.cTnI免疫原性肽的选择

2.免疫人cTnI合成肽多克隆抗体的质量鉴定

3.家兔抗血清的纯化及抗血清的蛋白含量的测定

4.胶体金免疫层析分析法的建立

5.免疫层析分析试纸条用膜材料的选择

6.硝酸纤维素膜上包被抗体喷涂量的选择

7.胶体金免疫层析试纸条质量鉴定

讨论

结论

参考文献

综述 心肌肌钙蛋白在心肌损伤中的检测意义

致谢