一个新的抗人DR5单克隆抗体的肿瘤杀伤活性与作用机制的研究

摘要

TRAIL(tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand)发现于1995年，是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的一个新成员，它因能够特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对大多数正常细胞没有毒性而备受人们的关注。DR5是TRAIL的受体之一，属于TNF受体超家族。与Fas相似，DR5也能够被一些特异的单克隆抗体激活而引起肿瘤细胞死亡。此类的单抗己初步显示出了在癌症治疗方面的潜力。我们在研究中筛选出了一个新的小鼠抗人DR5单抗——AD5-10，该抗体在体外无交联剂的条件下能够诱导多种肿瘤细胞凋亡，而且表现出很好的体内肿瘤杀伤活性。AD5-10和TRAIL在与DR5的结合中没有竞争，两者的联合使用能显著增强对肿瘤细胞的杀伤力。我们对TRAIL和AD5-10的作用进行了比较，发现AD5-10在Jurkat细胞中既能够引起Caspase依赖的细胞死亡又能够通过Caspase非依赖的途径杀死细胞，而TRAIL只能引起Caspase依赖的细胞死亡。另外，AD5-10在激活JNK/p38MAPK和对NF-κB活性的调控方面与TRAIL也不尽相同。我们的研究首次发现了DR5能够介导Caspase非依赖的细胞死亡，并首次展示了DR5与不同的细胞外蛋白作用时能够在同一细胞系中激活不同的信号途径。　　本文对人DR5的胞外区的结构和功能做了初步的研究，确定了DR5分子上两个TRAIL结合位点在一级结构上的位置。　　本文还克隆出了抗人DR4和抗人DR5两个小鼠单抗成熟蛋白全编码区的cDNA，并对单链抗体的构建、表达和纯化做了初步探索。

目录

论文说明：缩写词对照表

关于学位论文使用授权的说明

第一部分：AD5-10的制备、肿瘤杀伤活性与细胞信号的研究

前言

结果

人DR5和人DR4胞外区蛋白的表达与纯化

抗人DR5和人DR4单克隆抗体的制备

AD5-10与DR5的特异结合

ADR5-10在体外无交联剂的情况下诱导多种肿瘤细胞系的调亡

ADR5-10的体内肿瘤杀伤活性

ADR5-10与TRAIL协同诱导肿瘤的调亡

ADR5-10对人正常细胞没有毒性

ADR5-10激活caspase级联

ADR5-10引起caspase非依赖的细胞死亡

ADR5-10通过caspase非依赖的途径激活JNK/p38激酶

ADR5-10对NF-κB活性的调控

讨论

小结

第二部分：DR5胞外区结构与功能的初步研究

前言

结果

讨论

第三部分：小鼠单克隆抗体基因cDNA的克隆与单链抗体的构建

前言

结果

讨论

附：小鼠免疫球蛋白抗原补决定区（CDR）的区分（Kabat）规则

总结与展望

材料和方法

实验材料

实验方法

参考文献

综述：凋亡之后的热点——caspase非依赖的程序性细胞死亡

硕博连续期间论文写作、专利与参加会议情况

致谢

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