昆明市区2002年和2004年轮状病毒NSP4的基因分析及毒力研究

摘要

本研究从2002年和2004年昆明地区婴幼儿腹泻的轮状病毒感染者大便样品中，通过RT-PCR，PCR扩增了22株轮状病毒株的NSP4全长基因及其cDNA序列，并对cDNA序列测序，发现这些病毒株同属Wa株轮状病毒株，它们的NSP4氨基酸序列高度保守，仅在79位、139位氨基酸位点存在差异。我们选取了139位氨基酸不同(Ⅴ/Ⅰ)的两株病毒株：02K1株和04K44株，(02K1株139位氨基酸为V，04K44株为Ⅰ)，将两株病毒株NSP4蛋白的86～ 175氨基酸的编码序列连入表达载体pGEX-5X-1，构建重组质粒：02K1-pGEX-5X-1-NSP486～175，04K44-pGEX-5X-1-NSP486～175。为了评价纯化出的这两株病毒NSP4蛋白氨基酸位点变异和毒力差异的关系，我们建立了ICR乳鼠腹泻模型：在ICR乳鼠中，通过腹腔注射4种不同蛋白的纯化液，比较它们致小鼠腹泻的差异。结果发现：2种融合蛋白GST-NSP486～175蛋白的毒力均比两种目的蛋白NSP486～175蛋白强；融合蛋白02K1-GST-NSP486～175的毒力较04K44-GST-NSP486～175强，两种目的蛋白02K1-NSP486～175；04K44-NSP486～175之间，毒力差异不明显，说明139位氨基酸位点的变异并不影响NSP4蛋白的毒力改变。

目录

论文说明：缩略词表

摘要

前言

一、实验材料和方法

(一)、实验材料

(二)、实验方法

二、结果与分析

三、讨论

四、小结

参考文献

论文综述轮状病毒NSP4蛋白质研究进展

一、NSP4蛋白的基因特征

二、轮状病毒致病机制及NSP4蛋白功能研究

三、NSP4蛋白氨基酸位点改变和毒力的关系

四、NSP4的体外表达

五、NSP4蛋白质的免疫原性研究

六、结语

参考文献

附录

致谢

研究生简历

论文独创性声明及论文使用授权声明