心肌肥厚、肥厚-逆转和慢性心力衰竭心肌中PKCε信号复合物的蛋白质组学研究

摘要

第一部分大鼠压力负荷型心肌肥厚、肥厚-逆转及慢性心力衰竭模型的建立及相关问题探讨 [目的]探讨压力负荷型心肌肥厚(POH)、肥厚-逆转(POH-Re)、慢性心力衰竭(HF)模型的建立方法及其评价体系。 [方法]8w龄SD雄性大鼠随机分入2组：腹主动脉缩窄组(AAC)和假手术组(sham)。AAC组大鼠以1％戊巴比妥麻醉后行肾上腹主动脉缩窄术，sham组大鼠同样麻醉、开腹、游离腹主动脉，但主动脉只挂线不结扎。两组动物术后常规使用抗生素3天。术后12w，所有大鼠行超声心动图测定，根据超声心动图测得的左室重量/体重(LVmass/BW)比值，AAC组大鼠中凡LVmass/BW升高者随机分入心肌肥厚组(POH-NF，n=20)、逆转组(POH-Re，n=12)、心衰组(POH-F，n=29)，进行不同处理：POH-NF组处死取材；POH-Re组以福辛普利(Squibb，10mg/kg/day)和卡维地洛(Roche，0.5mg/kg/day)灌胃8w后处死取材；POH-F组给予高盐饮食12w后处死取材。所有动物取材前先行超声心动图测定，再经颈动脉插入心导管行血流动力学测定，最后取材，称心、肺湿重，并作心、肺组织形态学观察。 [结论]通过AAC法成功建立了大鼠POH模型，在此基础上，给予长期过度钠负荷建立了CHF模型，而应用ACEI+β阻滞剂联合干预成功逆转了POH。用超声心动图、血流动力学、心肺重量指数、镜下心、肺组织形态学和症状观察作为一个系统的评价体系，能较好地区分小动物实验中的心肌肥厚和心力衰竭。 第二部分心肌肥厚、肥厚-逆转和慢性心力衰竭心肌中PKCε信号复合物的蛋白质组学研究 [目的]探讨压力负荷型心肌肥厚(POH)、肥厚-逆转、慢性心力衰竭(HF)过程中心肌PKCε的变化趋势，并分析、比较、鉴定不同病程中心肌PKCε信号复合物成分的改变，探寻PKCε参与心肌肥厚和心衰的可能作用机制，为防治心肌肥厚和心衰提供新的理论依据和治疗靶点。 [方法]通过对8w龄SD雄性大鼠行腹主动脉缩窄术(AAC)建立POH模型，同龄的假手术组大鼠作为对照组。术后12w，根据超声测得的左室重量指数(LVmass/BW)结果，AAC组大鼠被随机分入心肌肥厚组(POH-NF，n=20)、逆转组(POH-Re，n=12)、心衰组(POH-F，n=29)，进行不同处理：POH-NF处死取材；POH-Re以福辛普利、卡维地洛灌胃8w后处死取材；POH-F给予高盐饮食12w后处死取材。所有动物在取材前均需行超声心动图和血流动力学测定，取材后留取部分心、肺组织作形态学观察。然后对这三组动物的心脏左室组织进行WesternBlot分析，发现不同病变阶段PKCε的变化趋势。同时，三组动物心脏左室匀浆分别与PKCε抗体免疫共沉淀，从而分离出相应的PKCε复合物。得到的免疫共沉淀产物依次行双向电泳和质谱分析，比较这些PKCε复合物的成分和含量，鉴定有意义的差异蛋白质，最后用免疫共沉淀和WesternBlot方法证实这些差异蛋白质存在于PKCε复合物中。 [结论]PKCε通过形成不同的信号复合物、经由不同的信号通路参与POH、HF和POH逆转的形成过程。11种已鉴定的PKCε结合蛋白质中有9种蛋白质(除了MLC2和αBC)是第一次发现它们参与POH和HF进展，具有重要的理论意义和学术价值。 本研究结果提示，补充MAD1和LynA蛋白可能有助于逆转心肌肥厚，而抑制sipa-1蛋白可能在一定程度上延搁HF的进展。蛋白质翻转可能成为未来治疗心肌肥厚、心力衰竭的发展方向。PKCε调节剂则具有更令人期待的治疗潜力。

目录

英文缩略词汇表

第一部分中文摘要

第一部分英文摘要

第二部分中文摘要

第二部分英文摘要

第一部分大鼠压力负荷型心肌肥厚、肥厚-逆转及慢性心力衰竭模型的建立及相关问题探讨

第二部分心肌肥厚、肥厚-逆转和慢性心力衰竭心肌中PKCε信号复合物的蛋白质组学研究

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献：

论文综述 一 PKCε在心肌肥厚和慢性心力衰竭中的作用地位

论文综述二 心血管疾病蛋白组学研究进展

致谢