1.肠道通透性HPLC-ELSD检测方法研究;2.经大孔树脂处理的中药提取物中残留溶剂分析方法研究

摘要

一、肠道通透性HPLC-ELSD检测方法研究 目前国际通用的测定肠道通透性的指标是乳果糖和甘露醇排出率比值(L/M)，该比值能真实地反映肠粘膜通透性的变化，是一种无创的诊断肠粘膜屏障功能的方法，现已广泛用于临床的肠道通透性检测，评价患者肠粘膜屏障功能，如IHV感染患者、肝硬化患者、腹部疾病患者、胰腺炎患者、器官移植患者、消化道肿瘤患者、食物过敏患者以及烧伤、休克、骨折等一些外科疾病患者。 本实验建立了尿样中甘露醇和乳果糖HPLC-ELSD分析方法，测定尿样中L/M排出率比值。色谱条件：应用Alltech prevailcarbohydrate分析柱(250mm×4.6 mm，5μm)，乙腈-水(8：2，V/V)为流动相，流速为1ml/min；EL,SD漂移管温度为86℃，载气流速为1.8L/min，Gain值为4，Impactor设为Off。结果显示甘露醇和乳果糖的线性范围分别为20～960mg/L(r=0.9973)和25～800mg/L(r=0.9962)，日内精密度(RSD)分别为1.5％和1.3％(n=6)，平均加样回收率分别为94.4％和95.0％，最小检测限分别为200ng和250ng；肝硬化腹水患者的肠道通透性(L/M：0.40±0.34)较正常人(L/M：0.025±0.005)显著增高。 采用HPLC-ELSD法检测肠道通透性，准确度高、重复性好，样品前处理简单，是临床评价小肠粘膜屏障功能比较实用的方法。临床上对危重患者的肠道通透性检测，将对减少全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍综合症(MODS)发生率，降低病死率等有着重要作用。 二、经大孔树脂处理的中药提取物中残留溶剂分析方法研究 大孔吸附树脂是一类高分子聚合物，近年来广泛应用于中草药中有效成分的富集和纯化。但是，目前市场上的所有树脂均为化工树脂，含有一定量的溶剂残留，因此在分离和纯化的过程中，树脂中的残留溶剂会带入中药提取物中，影响产品的安全性，因此建立中药提取物中残留溶剂的有效检测方法已成为亟待解决的问题。 本实验采用顶空进样毛细管气相色谱方法，以四氢呋喃和苯丙酮为内标，对经过大孔吸附树脂处理的中药提取物中可能残留的溶剂正己烷、苯、甲苯、苯乙烯、二甲苯、二乙苯、二乙烯苯、萘进行检测。 本实验考察了程序升温条件以及进样瓶平衡温度、进样瓶平衡时间、加压时间、定量环填充时间、定量环平衡时间、定量环进样时间等顶空条件，得到如下测定条件：色谱柱为Agilent DB-624毛细管气相色谱柱(30.0m×0.32mm×1.8μm)；程序升温条件为：80℃， 240℃，1min；载气流速为1.5ml/min，进样口温度为280℃，检测器温度为250℃(FID)；进样瓶平衡温度为70℃，进样瓶平衡时间为60min，样品瓶不加压，定样环填充时间为2min，定量环平衡时间为1min，定量环进样时间为1min。 正己烷、苯、甲苯、苯乙烯、二甲苯、二乙苯、二乙烯苯、萘线性关系良好，r为0.9976～0.9999，日内精密度(RSD)均小于5％，高中低三个浓度的平均回收率为82.8％～103.7％，最小检测限为0.098～1.06ng/ml；样品中残留三种有机溶剂——正己烷、苯以及甲苯，测得量分别为0.35、0.29、0.1μg/g，其限量符合国家标准，表明大孔树脂分离纯化中药提取物安全、可靠。

目录

声明

摘要

第一部分肠道通透性HPLC-ELSD检测方法研究

第一章论文综述

一、肠粘膜屏障和肠粘膜通透性

二、肠道通透性检测的意义

三、肠道通透性检测方法

第二章肠道通透性HPLC-ELSD检测方法的研究

一、主要仪器及试剂

二、ELSD检测条件的优化

三、实验条件及方法

四、方法学考察

五、结果和讨论

参考文献

第二部分经大孔树脂处理的中药提取物中残留溶剂分析方法研究

第一章论文综述

一、大孔吸附树脂的概述

二、大孔吸附树脂在中草药分离纯化中的应用

三、大孔吸附树脂的安全性

四、有机残留溶剂限度规定

五、有机残留溶剂检测方法

第二章经大孔树脂处理的中药提取物中残留溶剂分析方法研究

一、仪器与试药

二、溶液中NaCO3浓度的选择

三、色谱条件的选择

四、顶空条件的选择

五、方法学考察

六、样品测定

七、结果与讨论

参考文献

第三部分总结和讨论

一、肠道通透性HPLC-ELSD检测方法的研究

二、经大孔树脂处理的中药提取物中残留溶剂分析方法研究

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