应用合成致死原理筛选胰腺癌对化疗药物反应的关键基因

摘要

目的：本研究的目的在于应用全基因组范围内合成致死筛选的方法，寻找胰腺癌对化疗药物耐药中的关键基因，以期为胰腺癌的诊断和治疗提供新的生物标记物、治疗靶点和联合治疗方案。
　　 方法：通过分子克隆的途径构建以piggy Bac转座子为基础的全基因组搜寻载体；确定人胰腺癌细胞系(Panc-1)的特性；通过DNA转染和以荧光素酶为基础的报告基因检测建立并筛选含有稳定四环素介导的基因调控系统的Panc-1细胞株；利用大规模电穿孔转染和piggyBac介导的基因重组建立Panc-1细胞株的全基因组范围那突变文库；并进一步进行了与吉西他滨合成致死的预筛选。
　　 结果：成功构建了以piggyBac转座子为基础的基因搜寻载体；筛选得到了2个具有稳定四环素基因表达调控系统的Panc-1细胞株，即Panc-1-9.3和Panc-1-1781细胞株；成功建立了Panc-1细胞全基因组范围内的随机基因突变文库，进一步将进行吉西他滨合成致死的筛选。
　　 结论：成功构建了含有高度可调节性的四环素调控系统的人胰腺癌细胞系以及全基因组范围内的随机突变文库。为在胰腺癌中进行化疗药物合成致死基因筛选提供了有用平台。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表、图表目录

前 言

材料与方法

一 材料

1.质粒

2.细胞株

3.细胞培养所需试剂

4.主要药物试剂

5.主要溶液配制

6.主要设备

二 实验方法

1.质粒的制备

2.细胞培养

3.细胞生长曲线和倍增时间的测定

4.药物对细胞的半量致死浓度(IC50)的测定

5.脂质体转染质粒DNA

6. Tet-off表达系统的荧光素酶表达鉴定

7. 电穿孔转染质粒DNA

8. 双层软琼脂法细胞培养

实验结果

1. PANG-1细胞株的生长情况

2. 稳定表达四环素基因表达调控体系(Tet-Off)的PANC-1细胞株的建立

3. 基因突变文库的建立

讨论

结论

参考文献

综述：合成致死原理的研究历程与进展

致谢