中药单体对cTnT转基因扩张型心肌病小鼠模型的治疗作用及机理研究

摘要

背景近年来心血管领域的一个研究热点是心血管重构的药物干预。已发现多种西药及中药有效成分，能够逆转高血压、心梗等导致的心脏重构，尤其是左心室肥大(leftventricularhypertrophy,LVH)的发生和发展。然而却缺乏能够有效逆转扩张型心肌病(dilatedcardiomyopathy,DCM)的心脏扩张及心功能衰竭的药物。本文从对心血管疾病有较好疗效的中药单体中挑选出11种，利用本所遗传中心建立的cTnTRi41w转基因DCM小鼠模型，筛选得到可改善DCM心脏功能及重构的药物两种，分别是Rb1(Ginsenoside-Rb1)和TMPP(Tetramethylpyrazinephosphate)，我们从多个层次研究其药理作用并进行机制的研究。方法对2月龄的cTnTRaw阳性鼠进行心脏超声检测，计算左心室收缩期内径(leftventricularinternaldiameteratend-systole,LUIDs)的平均值和95％的可信区间。我们将95％的可信区间的上限作为心脏扩张的标准，排除部分表型不显著的cTnTRi41w阳性鼠。其余的阳性鼠被随机分为模型组和人参皂Rbl治疗组(70mglkgld)。用相同年龄的阴性鼠作为对照组。分组后每个月进行一次超声。连续给药7个月。在长期给药的过程中以及给药终点，观察各给药组与模型组心功能各项指标的变化。进行Kaplan-Meier生存分析。计算心重指数。HE染色和Masson染色观察心肌细胞变化及间质变化。透射电镜分析心肌超微结构。RTPCR检测心肌粘附蛋白Cx40,Cx43,E-cad,N-cad,P-cad,itga8和itgblbp3的表达。免疫荧光激光共聚焦观察心肌粘附分子Itga8的表达与分布。Westernblot检测心脏HB-EGF.pSTAT3STAT3表达水平。结果Rbl长期给药能显著改善该模型的心功能和心脏几何构型，将死亡率降低50％oRbl治疗组心重指数降低11.3％(P<0.05)。光镜观察显示Rbl能减轻心肌细胞排列紊乱以及间质纤维化。透射电镜观察显示Rbl能减轻心肌超微结构的破坏。RTPCR结果显示，在模型中Cx40表达降低，E-cad,itga8和itgb1bpi表达升高，但在Rb1组中接近正常水平。免疫荧光激光共聚焦结果显示Rbl可降低Itga8的表达量并调节其分布。Westernblot结果显示Rbl能够显著降低模型中的HB-EGF及pSTAT3的表达，但tSTAT3的表达在三组无显著差异。结论本研究显示，Rbl与TMPP可作为治疗遗传性DCM的候选药物。Rb1可改善扩张型心肌病模型的心功能，抑制心脏重构，其作用可能部分通过调节粘附蛋白的表达，抑制心肌病发生中的HB-EGF表达及抑制下游信号pSTAT3的激活实现的。

目录

第一部分 人参皂甙Rb1对cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠模型的治疗作用及机理研究

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分 磷酸川芎嗪TMPP对cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠模型的治疗作用及机理研究

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三部分 心脏特异表达NOL3转基因小鼠的建立

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

附录 缩略语

个人简历

致谢